[发明专利]用于MSTN基因敲除猪鉴定的功能核酸快速PCR方法与试剂盒

摘要

本发明属于转基因生物材料中转基因成分检测领域，涉及用于MSTN基因敲除猪鉴定的功能核酸快速PCR方法与试剂盒。根据基因敲除位点设计特异引物，针对不同等位基因扩增出不同的特异性片段，实现对MSTN基因敲除猪的检测。PCR引物组合1序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4，得到SEQ ID NO:1所述扩增片段；引物组合2如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:4所示，得到SEQ ID NO:2所述扩增片段。当扩增产物只有一条290bp条带判定为野生型，只有一条268bp条带判定为MSTN基因敲除纯合型，同时含268bp和290bp条带判定为MSTN基因敲除杂合型。还公开了试剂盒配置及其应用。

主权项

1.一种检测MSTN基因敲除猪成分的PCR方法，其特征包括，根据基因敲除位点,设计2条不同的正向引物和一条共用的反向引物；所述的其中一条正向引物是针对野生型检测的引物，该正向引物的序列如SEQ ID NO:3所示，该引物的3′端终止于对应的敲除位点，即SEQ ID NO:3所示序列的第42位和第43位的AG两个碱基处；所述的另一条正向引物是针对敲除型检测的引物，该正向引物的序列如SEQ ID NO:5所示，该引物的3′端跨越敲除位点，即SEQ ID NO:3所示序列的第42位和第43位的AG两个碱基处后再延伸两个碱基，即SEQ ID NO:5所示序列的第22位和第23位的CT两个碱基；针对用于野生型检测的正向引物的5′端进行功能核酸接头设计，即在正向引物的5′端添加20bp的功能核酸序列，该序列是GCTTATCTATAGCATTGAAG，使野生型的引物和敲除型的引物的扩增片段大小出现差异，通过PCR扩增，使MSTN基因被敲除猪、野生型猪及其杂合子猪能扩增出不同大小的片段，实现对基因敲除猪快速简便的检测。