[发明专利]一种基于单链DNA构建R-loop高通量测序文库的方法在审
| 申请号： | 201810423697.1 | 申请日： | 2018-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN108588176A | 公开（公告）日： | 2018-09-28 |
| 发明（设计）人： | 唐琼;沈欢;陆利;秦闯华;鞠魏;唐薇;朱虎;徐根明;潘艺;赵谦 | 申请（专利权）人： | 湖南大地同年生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6804 | 分类号： | C12Q1/6804;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410205 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于单链DNA构建R‑loop高通量测序文库的方法。本发明通过利用抗体特异性的对DNA/RNA杂合链进行捕获，随即进行单链DNA建库，目的是解决R‑loop测序建库过程中插入片段长度、R‑loop捕获、加接头等问题，具有精准、高效、高通量、灵敏、可重复、操作简单等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 单链DNA 高通量 测序文库 构建 建库 捕获 生物技术领域 抗体特异性 插入片段 可重复 测序 杂合 灵敏 | ||
【主权项】：
1.一种基于单链DNA构建R‑loop高通量测序文库的方法，其特征在于按照以下步骤进行：(1)进行基因组DNA片段化处理及纯化；(2)在步骤(1)后直接加入复合物[S9.6]/Protein A，实现DNA/RNA杂合链的捕获；(3)在步骤(2)后直接加入酶和缓冲液组分，实现末端修饰；(4)在步骤(3)后直接进行变性，变性条件为95℃下10min，变性后立即置冰上；(5)在步骤(4)后直接加入3'接头、酶和缓冲液，实现3'接头连接；(6)在步骤(5)后直接加入5'接头、酶和缓冲液，实现5'接头连接；(7)在步骤(6)后直接加入扩增体系，进行文库的放大；(8)在步骤(7)后直接加入磁珠对扩增后的文库进行纯化，纯化后的产物即为上机文库。
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