[发明专利]一种生产嵌合抗原受体修饰的γδT细胞的方法

摘要

本发明公开了一种生产嵌合抗原受体修饰的γδT细胞的方法。本发明将靶向于FPP合成酶的shFPPS通过慢病毒载体转染K562细胞，下调了K562细胞中FPPS的表达量，构建了FPPS表达量降低的K562‑shFPPS细胞系。本发明将K562‑shFPPS细胞系加入γδT细胞培养体系中与γδT细胞进行共培养，发现K562‑shFPPS细胞系能促进γδT细胞的体外分化和扩增。本发明还将表达CAR的慢病毒载体加入含有该细胞系的γδT细胞培养体系中进行共培养，发现K562‑shFPPS细胞系还可以有效提高CAR基因的转染率。本发明提供的方案有效解决了大规模生产CAR‑γδT细胞的技术瓶颈，具有良好的应用前景。

主权项

1.FPPS表达被抑制的肿瘤细胞在如下A1)-A8)中至少一种中的应用:/nA1)促进γδ T细胞扩增;/nA2)制备促进γδ T细胞扩增的产品;/nA3)促进γδ T细胞分化;/nA4)制备促进γδ T细胞分化的产品;/nA5)生产CAR-γδ T细胞;将表达嵌合抗原受体的载体与γδ T细胞共培养,得到CAR-γδ T细胞,所述表达嵌合抗原受体的载体为表达嵌合抗原受体的慢病毒载体;所述共培养体系中含有FPPS表达被抑制的肿瘤细胞；所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的；所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞；所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA；所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA；所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示；所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示；所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示；/nA6)制备生产CAR-γδ T细胞的产品;将表达嵌合抗原受体的载体与γδ T细胞共培养,得到CAR-γδ T细胞,所述表达嵌合抗原受体的载体为表达嵌合抗原受体的慢病毒载体;所述共培养体系中含有FPPS表达被抑制的肿瘤细胞；所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的；所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞；所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA；所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA；所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示；所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示；所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示；/nA7)提高A5)或A6)中所述慢病毒对γδ T细胞的转染率;/nA8)制备提高A5)或A6)中所述慢病毒对γδ T细胞的转染率的产品;/n所述FPPS表达被抑制的肿瘤细胞是将抑制FPPS编码基因表达的物质导入肿瘤细胞得到的;/n所述抑制FPPS编码基因表达的物质通过慢病毒载体导入肿瘤细胞;/n所述抑制FPPS编码基因表达的物质为抑制FPPS编码基因表达的shRNA;/n所述抑制FPPS编码基因表达的shRNA为由茎I、环和茎II形成的茎环结构的单链RNA;/n所述茎I的序列如序列表的序列2第1-21位所示;所述环的序列如序列表的序列2第22-27位所示;所述茎II的序列如序列表的序列2第28-48位所示;/n所述肿瘤细胞为K562细胞；/n所述A1）或A3）为非疾病诊断治疗应用。/n