[发明专利]7β-羟基甾醇脱氢酶突变体及其在制备熊脱氧胆酸中的应用

摘要

本发明公开了一种通过蛋白质工程获得的辅酶偏好性改变的7β‑羟基甾醇脱氢酶突变体、其编码基因，含有该基因序列的重组表达载体和重组表达转化体，重组突变体酶制剂的制备方法，以及该重组突变体酶制剂在制备熊脱氧胆酸中的应用。通过酶法耦联的辅酶再生，本发明所述重组突变体酶制剂可以高效利用相对廉价的氧化型辅酶I(NAD+)而非昂贵的氧化型辅酶II(NADP+)，催化7‑羰基石胆酸的不对称还原，有效降低了生产成本，并且具有操作简单、反应条件温和、环境友好，产率高等优势，在鹅脱氧胆酸差向异构制备熊脱氧胆酸中具有很好的应用前景。

主权项

1.一种7β‑羟基甾醇脱氢酶突变体，其特征在于，其是将如SEQ ID No.2所示氨基酸序列的蛋白质的第17位苏氨酸、第18位谷氨酸、第22位赖氨酸、第39位甘氨酸、第44位赖氨酸、第64位精氨酸、第67位苯丙氨酸、第93位半胱氨酸、第114位缬氨酸或第243位天冬酰胺中的一个或多个氨基酸残基替换为其他氨基酸残基所形成的新氨基酸序列的衍生蛋白质。