[发明专利]基于微流控芯片检测游离甲状腺素fT4试剂盒及制备和检测方法

摘要

本发明公开了一种基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒及制备和检测方法，该试剂盒的制备方法，包括以下步骤：(1)微流控芯片包被；(2)荧光微球标记；(3)微流控芯片组装；(4)定标品的制备；(5)得基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒。制备得到的游离甲状腺素fT4试剂盒采用竞争法进行测定，选取高灵敏度的时间分辨荧光物作为标记物，在荧光微球上进行抗原的标记，利用免疫竞争反应进行分析检测，所制备的试剂性能可达同等化学发光试剂的水平。免疫反应后，使用清洗液将多余组分完全去除后，对免疫反应结合上的荧光微球进行检测读数，避免了引入显色液进入芯片内部反应不充分或者显色后读数不及时的问题。

主权项

1.一种基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)微流控芯片包被：取游离甲状腺素fT4鼠单抗Anti‑Thyroxine 6901 SPTN‑5 1mg，加50mM pH9.6的CB缓冲液至1mL，按照单个芯片25μL加入微流控芯片反应腔室内，温浴2小时后对芯片进行清洗；(2)荧光微球标记：取游离甲状腺素fT4抗原Thyroxine加入至荧光微球溶液中，并涡旋混匀，其中，荧光微球是经过活化处理的，反应结束后，加入终止液对反应进行终止，后离心清洗，加入封闭液进行封闭，封闭后的荧光微球进行离心清洗，使用微球储存液进行保存；(3)微流控芯片组装：向微流控芯片的反应腔室预先进行封闭处理，封闭液添加后在烘箱中进行烘干处理，在封闭后的中层芯片背部反应腔室下部内加入所述步骤(2)中的荧光微球溶液，于真空烘箱中真空干燥，荧光微球在芯片中呈现小液滴形态，不发生扩散；芯片准备完毕后采用超声键合的方式，依据芯片结构依次将滤血垫，加样密封垫，导电橡胶，吸水纸以及密封圈加入芯片内部，将三层芯片按照超声键合线完成合并；(4)定标品的制备：定标品由A组分和B组分构成；根据抗原浓缩液的估算浓度，用定标品稀释液将抗原浓缩液稀释作为定标品抗原母液备用；定标品稀释液即为定标品A组分，浓度为0.5ng/mL，2‑8℃保存；定标品B组分：用定标品稀释液将游离甲状腺素fT4抗原母液稀释至2ng/mL，2‑8℃保存；(5)得基于微流控芯片的游离甲状腺素fT4试剂盒。