[发明专利]一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法在审
| 申请号： | 201810444880.X | 申请日： | 2018-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN108614111A | 公开（公告）日： | 2018-10-02 |
| 发明（设计）人： | 窦文超;赵广英;祝春节;吴遵义 | 申请（专利权）人： | 浙江工商大学 |
| 主分类号： | G01N33/558 | 分类号： | G01N33/558;G01N33/543;G01N33/569 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 刘静;邱启旺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： |
本发明公开了一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7(E.coli O157:H7)的免疫层析检测方法，以活性染料为染色剂制备彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs，在 |
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| 搜索关键词： | 二氧化硅纳米 微球 免疫层析检测 标记物 包被 大肠 鼠抗 制备 羧基乙基硅烷三醇钠盐 单克隆标记抗体 核壳型二氧化硅 三明治夹心结构 致病菌 检测灵敏度 羊抗鼠IgG 表面固定 捕获抗体 环保经济 活性染料 快速检测 纳米颗粒 预先混合 羧基改性 羧基修饰 复合物 加样孔 检测线 染色剂 试纸条 质控线 省时 应用 | ||
【主权项】：
1.一种彩色二氧化硅纳米微球作为标记物的大肠埃希氏菌O157:H7的免疫层析检测方法，其特征在于，该方法包括：(1)制备彩色二氧化硅纳米微球：在水溶液中加入二氧化硅纳米微球、有机染料和硅烷偶联剂，通过硅烷偶联剂将有机染料一步反应连接到二氧化硅纳米微球上，制得彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs；(2)在![]()
体系中通过羧基乙基硅烷三醇钠盐将羧基修饰到彩色二氧化硅纳米微球colored SiNPs的表面，得到羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNPs；(3)在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNP表面进行抗体偶联：通过碳二亚胺化学法在羧基改性的彩色二氧化硅纳米微球carboxyl‑modified colored SiNP表面固定鼠抗E.coli O157:H7单克隆标记抗体mAb1，制备免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒colored SiNPs‑mAb1；(4)免疫层析试纸条的组装：试纸条由样品垫、释放垫、NC膜、吸水纸组成，将鼠抗E.coli O157:H7单克隆捕获抗体mAb2喷涂于NC膜的检测线，将羊抗鼠IgG喷涂于质控线，将喷好的NC膜贴于PVC底板，依次将吸水纸、释放垫和样品垫组装至PVC底板，完成试纸条的组装；(5)将待测样品和步骤(3)制备的免疫核壳型二氧化硅纳米颗粒colored SiNPs‑mAb1混合后滴至试纸条的加样孔，在检测线与mAb2形成三明治夹心结构，实现对大肠埃希氏菌O157:H7的快速检测。
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