[发明专利]一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法

摘要

本发明公开的属于生物技术领域，具体为一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，该含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法的具体制备步骤如下：S1：提纯间充质干细胞因子冻干粉：提纯包括选取培植对象并清理、清理后的组织进行传代培养、获取传代培养的上清液和上清液浓缩的步骤；S2：选取细胞因子冻干粉配剂；S3：将细胞因子冻干粉与配剂混合、保存，本方案通过简化实验提取步骤，提高提取效率，通过离心浓缩等方案进行组织处理，保持细胞的活性，提供细胞因子需要的营养成分。

主权项

1.一种含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法，其特征在于：该含人间充质干细胞因子的精华液的制备方法的具体制备步骤如下：S1：提纯间充质干细胞因子冻干粉：提纯包括选取培植对象并清理、清理后的组织进行传代培养、获取传代培养的上清液和上清液浓缩的步骤；(1)：选取培植对象并清理：选取脐带、结缔组织或者骨髓组织中的一种或几种作为培植对象，将选取的培植对象剪成碎粒，碎粒状的培植对象置于培养瓶中，培养瓶经过灭菌、消毒处理，培养瓶内存有30％的胎牛血清、2％的胶原蛋白酶，静置20分钟后，对培养瓶进行振荡处理，振荡频率30Hz，振荡时间为3‑5分钟，将振荡后的培养瓶内的培养液以及培植对象通过60目的过滤筛进行过滤，保留过滤后残留物，残留物为清理后的培植对象；(2)：清理后的组织进行传代培养：将(1)中的残留物加入培养皿中，并在培养皿中预存培养液，培养液采用生理盐水、0.1％‑0.125％的蛋白酶、鸡蛋清，将组织细胞培养至8‑10代时，将该培养瓶内的组织细胞以及培养液进行离心处理；(3)：获取传代培养的上清液：通过(2)离心静置后获取上清液；(4)：上清液浓缩：将(3)内的上清液再次离心，去除离心产生的上清液，保留下部分；S2：选取细胞因子冻干粉配剂：选取5份人体半乳糖、3份甘油、0.1份消化酶作为细胞因子冻干粉配剂的原料，并将细胞因子冻干粉配剂的原料均匀混合；S3：将细胞因子冻干粉与配剂混合、保存：将细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液混合，在混合的过程中加入生理盐水，生理盐水的比重按照质量比为细胞因子冻干粉配剂、浓缩后的上清液总质量的(2‑2.2)倍，混合后低温存储。