[发明专利]一种抗体复合物的制备方法

摘要

本发明公开一种抗体复合物的制备方法。本发明通过在冰冻条件下实现C端‑C端连接的二价或双特异性抗体复合物的制备，条件温和，反应速度快，收率较高。相比常规方法所生产的C端‑N端连接的二价或双特异性抗体复合物本发明能够得到更高的亲和力，相比现有制备C端‑C端连接的二价或双特异性抗体的二硫桥接法或点击化学法，本发明具有更好的特异性和稳定性，同时步骤较少，表现在只在C端生成的醛基进行连接，生成的腙键或肟键在生理条件下稳定并且用还原剂还原后不可逆。

主权项

1.一种C端‑C端连接的二价抗体或双特异性抗体复合物的制备方法，包括如下步骤：(1)通过基因重组在抗体的C末端融合FGE识别氨基酸序列，通过体外加入FGE进行催化，得C末端定点醛基修饰的抗体；(2)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得二价抗体复合物，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:0.4～1.2；(3)将C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头，在冰冻条件下反应，得单一同双官能接头连接的抗体，其中所述C末端定点醛基修饰的抗体与醛基反应性同双官能接头的摩尔比为1:5～15；(4)将步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体，在冰冻条件下反应，得双特异性抗体复合物，其中步骤(3)得到的抗体和C末端定点醛基修饰的抗体的可变区不同。