[发明专利]一种简便快速检测牡蛎倍性的方法在审
| 申请号： | 201810465575.9 | 申请日： | 2018-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN108931468A | 公开（公告）日： | 2018-12-04 |
| 发明（设计）人： | 李永国;李琪;于瑞海 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | G01N15/14 | 分类号： | G01N15/14;A61B10/02 |
| 代理公司： | 青岛海昊知识产权事务所有限公司 37201 | 代理人： | 刘艳青 |
| 地址： | 266100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种简便快速检测牡蛎倍性的方法；首先在牡蛎两壳间靠近闭壳肌的边缘处，用尖嘴钳捏碎贝壳边缘，形成一条2‑3㎜的缝隙，然后用一次性注射器通过该缝隙，插入闭壳肌血淋巴窦内抽取血淋巴，血淋巴经无水乙醇固定后，离心倒掉上清液，然后加入PBS重新悬浮，再依次经RNA酶反应、PI染色。最后经300目筛绢过滤后，使用流式细胞仪检测DNA含量，确定倍性。本发明提供的通过抽取牡蛎闭壳肌血淋巴窦内的血淋巴进行倍性检测的方法，具有非致死、简便快速、不受牡蛎生活环境制约等优点，对于牡蛎多倍体育种研究，特别是对活体牡蛎多倍体的倍性检测和后续深入研究具有重要的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 牡蛎 血淋巴 闭壳肌 倍性 倍性检测 快速检测 抽取 多倍体 一次性注射器 多倍体育种 流式细胞仪 生活环境 无水乙醇 边缘处 尖嘴钳 上清液 碎贝壳 染色 活体 过滤 悬浮 致死 研究 检测 制约 | ||
【主权项】：
1.一种简便快速检测牡蛎倍性的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）在待检测的牡蛎两壳间靠近闭壳肌的边缘处，使贝壳边缘形成缝隙，缝隙的长度要便于插入注射器和确定闭壳肌的位置；（2）根据倍性检测需要和降低对检测样品刺激的原则，抽取闭壳肌血淋巴窦内的血淋巴；（3）将抽取的血淋巴滴入到无水乙醇中进行固定，放置后，使血淋巴细胞固定完全；（4）将固定的血淋巴细胞离心去掉上清液；（5）重新悬浮得到悬浮液，并去除RNA干扰；（6）染色；（7）检测倍性。
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