[发明专利]一种恒温链置换扩增技术及试剂盒

摘要

本发明公开了一种新型恒温链置换扩增技术，靶DNA序列经加热变性后，使用一对含有RNA序列的引物与模板DNA单链杂交，在链置换DNA聚合酶作用下延伸引物，产生含核糖核酸内切酶识別位点的靶DNA和RNA结合序列，由耐热核糖核酸内切酶水解切割识别位点，形成粘性末端，引物与粘性末端连接，在链置换DNA聚合酶作用下延伸3’端，并替代另一条DNA链，被置换链与引物杂交后又依次成为另一扩增反应的靶源，这些步骤在反应体系中不断重复，使靶DNA序列呈指数性增长。本发明简便、灵敏、快速、特异性好，可检测低限为数个基因拷贝数的DNA，解决了现有技术下核酸等温扩增的技术缺陷，可广泛用于临床医学、法医学、动植物检疫等领域。

主权项

1.一种恒温链置换扩增技术，包括准备单链DNA模板、生成3'端带酶切位点的目的DNA片段、SDA循环三个阶段，其特征在于使用一对与DNA模板3’‑末端序列互补的引物用于DNA模板结合，引物的5’和3’端为与靶序列互补的DNA序列，引物中间含有一段RNA序列，所述引物使延伸产物带有3’端核糖核酸内切酶酶切位点，能够被核糖核酸内切酶识别和水解切割，形成粘性末端，引物与粘性末端连接，在链置换DNA聚合酶作用下延伸3’端，并替代另一条DNA链，被置换链与引物杂交后又依次做为另一扩增反应的靶源，这些步骤在反应体系中不断重复，使靶DNA序列呈指数性增长。