[发明专利]一种新型抗菌鱼饲料的制备方法

摘要

本发明公开的事一种新型抗菌鱼饲料的制备方法，属于生物工程技术领域，该方法包括获取目的基因片段、构建重组表达质粒、制备重组蛋白以及重组蛋白与鱼饲料的混合，本发明成功构建了重组原核表达质粒，成功获得重组蛋白可溶性表达，明确该蛋白具有抑菌效果，将其运用于鱼饲料的制备中，解决了鱼类养殖过程中存在的死亡率高、污染大等问题，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种新型抗菌鱼饲料的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：步骤一：确定基因cp2‑2酶切位点和引物，所述引物包括上游引物为5’‑CGAGCTCCGAGTGCCCAAAATCA‑3’和下游引物为5’‑ACTCGAGTCAGTCAAATCTTTTGC‑3’，从条纹斑竹鲨脾脏提取RNA，利用引物进行特异性扩增，得到cp2‑2目的片段；步骤二：将步骤一获得的cp2‑2目的片段与质粒pET‑32a的菌株扩大培养后提取质粒DNA，将质粒DNA分别用SacI和XhoI双酶切、纯化回收，将回收得到的cp2‑2目的片段和载体片段pET‑32a连接，获得连接产物；步骤三：取5μL步骤二获得的连接产物转化至200μL大肠杆菌Rossetta感受态细胞中，吹打混匀，再依次进行冰浴30min，42℃热击90s，冰浴5min，然后加入LB液体培养基1mL，37℃摇床1h后，经Amp和CM抗性LB固体培养基筛选阳性克隆，经鉴定后得到重组表达质粒pET‑32a‑cp2‑2；步骤四：将步骤二获得的重组表达质粒pET‑32a‑cp2‑2进行重组蛋白诱导表达，再进行纯化、鉴定，获得cp2‑2重组蛋白；步骤五：将步骤四获得的cp2‑2重组蛋白添加到普通的鱼饲料中，搅拌均匀，获得一种新型抗菌鱼饲料。