[发明专利]一种SKA3基因干扰慢病毒载体及其制备方法在审
申请号: | 201810532427.4 | 申请日: | 2018-05-29 |
公开(公告)号: | CN108728493A | 公开(公告)日: | 2018-11-02 |
发明(设计)人: | 吴勇延;高伟;张璐;张宇良;洛鸿洁;李文奇;王斌全;张春明;温树信;牛敏;郑希望;崔佳佳;桑江玮;吴中强;石勇;杨东丽;赵沁丽;薄云峰;李会政 | 申请(专利权)人: | 山西医科大学第一医院 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/66 |
代理公司: | 太原申立德知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 14115 | 代理人: | 郭海燕 |
地址: | 030001 *** | 国省代码: | 山西;14 |
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摘要: | 本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种SKA3基因干扰慢病毒载体及其制备方法。本发明SKA3基因干扰慢病毒载体,所述的载体为人源U6启动子转录靶向人SKA3基因的shRNA模板序列。本发明的制备方法包括以下步骤:A1:依次用Age I和EcoR I酶切PLKO.1puro骨架载体质粒,凝胶电泳回收,将靶向人SKA3基因的3条不同shRNA模板DNA序列与凝胶电泳回收的PLKO.1puro骨架载体质粒连接,获得3个连接产物;A2:取三种菌液制备获得三种转化的菌液;A3:取三个LB琼脂板,在每个LB琼脂板中加入一种转化的菌液培养过夜;A4:从三个过夜培养的LB琼脂板上挑取单克隆菌,扩大培养后提取质粒,质粒进行琼脂糖凝胶电泳鉴定,阳性质粒电泳条带明显滞后于PLKO.1puro骨架载体质粒;A5:验证序列是否正确。 | ||
搜索关键词: | 质粒 慢病毒载体 骨架载体 基因干扰 琼脂板 制备 凝胶电泳 靶向 琼脂糖凝胶电泳 基因工程技术 模板DNA序列 转录 单克隆菌 电泳条带 菌液培养 菌液制备 扩大培养 连接产物 模板序列 验证序列 阳性质粒 回收 后提取 基因 菌液 酶切 转化 滞后 | ||
【主权项】:
1.一种SKA3基因干扰慢病毒载体,其特征是:所述的载体为人源U6启动子转录的靶向人SKA3基因的shRNA模板序列。
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