[发明专利]一种肿瘤靶向性载体pcTERT及其构建方法及其应用有效
申请号: | 201810543497.X | 申请日: | 2018-05-30 |
公开(公告)号: | CN108715863B | 公开(公告)日: | 2020-09-11 |
发明(设计)人: | 马杰;周超;赵通鉴;魏雪晨;周孟瑒;陆元花;宋卓瑶;王孝娟;赵畅 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12N15/85 | 分类号: | C12N15/85;C12N15/66;A61K48/00;A61P35/00 |
代理公司: | 北京金言诚信知识产权代理有限公司 11229 | 代理人: | 张学敏 |
地址: | 130000 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | 本发明涉及一种肿瘤靶向性载体pcTERT及其构建方法及其应用,属于基因工程领域。该载体以pcDNA3.1质粒为基础,以筛选获得的最佳长度的人端粒酶逆转录酶启动子hTERT启动子替代其原有的CMV启动子,在其后可连接不同种类的肿瘤杀伤性基因序列,使用转染试剂将重组载体转染到不同种类肿瘤细胞,在体内及体外实验中均取得了一定的肿瘤杀伤作用。一种有效的可供外源基因在肿瘤部位靶向表达的非病毒载体,有望在肿瘤的基因治疗中实现应用。 | ||
搜索关键词: | 一种 肿瘤 靶向 载体 pctert 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】:
1.一种肿瘤靶向性载体pcTERT,其特征在于是由下列步骤得到的:(1)以pcDNA3.1+为模板,设计上游引物:5’‑CTGACGCGTGGAGTTCCGCGTTAC‑3’及下游引物:5’‑CGCGCTAGCCAAAACAAACTCCCATTG‑3’,经PCR反应,得到pcDNA3.1+质粒中的cmv enhancer片段,并使其5’端带有MluI位点而3’端带有NheI位点;(2)以人基因组DNA为模板,设计上游引物:5’‑ATAACGCGTACCCTGGGAGCGCGAGCGGC‑3’,及下游引物:5’‑CGCGCTAGCCAAAACAAACTCCCATTG‑3’,经PCR反应,得到长度为378bp的hTERT启动子片段,并使其5’端带有NheI位点而3’端带有HindⅢ位点;(3)将pcDNA3.1+载体及PCR得到的增强子片段分别经MluI及NheI双酶切,T4DNA连接酶进行连接得到中间体1,将中间载体1与长度为378bp的启动子片段分别用NheⅠ及HindⅢ酶切后,T4DNA连接酶进行连接得到重组载体pcTERT。
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