[发明专利]一种利用微生物制备环孢菌素的方法

摘要

本发明涉及一种利用微生物制备环孢菌素的方法，属于微生物次级代谢产物应用领域。主要技术方案如下：活化地生弯颈霉菌C41‑3：将地生弯颈霉菌C41‑3接种在灭菌的PDA培养基上，置于25℃的常温培养箱，培养7天；制备种子液：将活化后的地生弯颈霉菌C41‑3置于原液体培养基中，在28℃、120r/min培养5d得到种子液；制备发酵液：将种子液按8vt％的接种量接种于察氏液体培养基中，在24℃、120r/min条件下摇床培养5d得到发酵液；环孢菌素的制备。本发明提供一种利用微生物制备环孢菌素的方法，缓解了环孢菌素A供不应求的问题。

主权项

1.一种利用微生物制备环孢菌素的方法，其特征在于，包括如下顺序的步骤：(1)活化地生弯颈霉菌C41‑3：将地生弯颈霉菌C41‑3接种在灭菌的PDA培养基上，置于25℃的常温培养箱，培养7天；所述的PDA培养基配方为：马铃薯100g、葡萄糖10g、琼脂10g、水500mL；(2)制备种子液：将活化后的地生弯颈霉菌C41‑3置于原液体培养基中，在28℃、120r/min培养5d得到种子液；所述原液体培养基配方为：葡萄糖50g，蛋白胨10g，KNO3 2g，MgSO4 2g，CaCl2 0.1g，(NH4)3PO4·3H2O 2g，水1000mL，装液量为2/5；(3)制备发酵液：将种子液按8vt％的接种量接种于察氏液体培养基中，在24℃、120r/min条件下摇床培养5d得到发酵液；所述察氏液体培养基的配方为蔗糖30g，NaNO3 3g，K2HPO4 1g，MgSO4 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4 0.01g，水1000mL，pH为5.0，所述察氏液体培养基的装液量为2/5；(4)环孢菌素的制备：向发酵液中加入等体积的乙酸乙酯，将发酵液和菌丝体全部浸泡；在24℃、120r/min条件下摇床培养24h后，超声震荡30min，静置待分层后取出上层有机相，静置、过滤、浓缩得到环孢菌素。