[发明专利]M8Sac71抗体及其制备方法与应用在审
申请号: | 201810549075.3 | 申请日: | 2018-05-31 |
公开(公告)号: | CN108690137A | 公开(公告)日: | 2018-10-23 |
发明(设计)人: | 李翠玲;李冰清;岳盈盈;宋楠楠;林玮;王玮玮 | 申请(专利权)人: | 山东省医学科学院基础医学研究所 |
主分类号: | C07K16/40 | 分类号: | C07K16/40;C07K16/06;G01N33/573 |
代理公司: | 济南鼎信专利商标代理事务所(普通合伙) 37245 | 代理人: | 彭成 |
地址: | 250062 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明公开了一种M8Sac71抗体,其制备方法为:(一)MARCH8Sac71肽段的合成:制备MARCH8Sac71肽段,该肽段的氨基酸序列如下所示:Ac‑T(Sac)ITPSSQDICRICHCEGDC‑NH2;(二)MARCH8Sac71肽段与BSA或KLH偶联;(三)免疫兔子制备抗体;(四)抗体的纯化:上述得到的血清,先利用非乙酰化肽段进行负筛选,再利用MARCH8Sac71肽段进行正筛选,得抗体,即为M8Sac71抗体。本发明的M8Sac71抗体,通过dot‑blot和竞争性实验证明了M8Sac71抗体的特异性,并进一步证明与丝氨酸乙酰化酶YopJ共转的MARCH8乙酰化水平大大提高,印证了M8Sac71抗体的有效性,可应用于检测MARCH8上的71位丝氨酸位点是否被乙酰化。 | ||
搜索关键词: | 抗体 肽段 制备 乙酰化 筛选 氨基酸序列 免疫兔子 丝氨酸乙 乙酰化肽 丝氨酸 再利用 酰化酶 血清 偶联 位点 应用 合成 检测 | ||
【主权项】:
1.一种M8Sac71抗体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:(一)MARCH8 Sac71肽段的合成:制备MARCH8 Sac71肽段,该肽段的氨基酸序列如下所示:Ac‑T(Sac)ITPSSQDICRICHCEGDC‑NH2;(二)MARCH8 Sac71肽段与BSA或KLH偶联:将上述合成的MARCH8 Sac71肽段与BSA或KLH偶联,得偶联产物;(三)免疫兔子制备抗体,包括以下步骤:(1)第一次免疫(0day):用偶联产物免疫兔子,免疫方式为:四肢腹侧4处注射,每只兔子的用量为:400μg/只的偶联产物;(2)第二次免疫(28day):第28天,进行第二次免疫,免疫方式为:四肢腹侧4处注射,每只兔子的用量为:200μg/只的偶联产物;(3)第三次免疫(49day):第49天,进行第三次免疫,免疫方式为:静脉注射,每只兔子的用量为:400μg/只的偶联产物;(4)采血:第59~61天,兔子耳缘静脉取血,经ELISA检测效价符合要求后,颈总动脉采血,制备血清;(四)抗体的纯化:上述得到的血清,先利用非乙酰化肽段进行负筛选,再利用MARCH8 Sac71肽段进行正筛选,得抗体,即为M8Sac71抗体;所述非乙酰化肽段的氨基酸序列如下所示:Ac‑TSITPSSQDICRICHCEGDC‑NH2。
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