[发明专利]一种铁线莲叶斑病拮抗菌的筛选方法在审
| 申请号： | 201810560518.9 | 申请日： | 2018-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN108504578A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 宋微;王磊;张虎;刘梦;周莉 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12N1/02 | 分类号： | C12N1/02 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 李倩 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种铁线莲叶斑病拮抗菌的筛选方法，包括如下步骤：制备铁线莲叶斑病致病菌悬液；取带有叶斑的铁线莲叶片，研磨后置于无菌水中，充分振荡后得到菌悬液；取1mL菌悬液加入99mL无菌水中，按1∶10进行梯度稀释，得到10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5的稀释液；取100μL不同稀释梯度的稀释液均匀涂布于LB培养基平板上进行培养；用无菌滤纸在LB培养基上培养后长出细菌的菌落上进行影印，然后接种至PDA培养基上培养，将铁线莲叶斑病致病菌悬液喷至PDA培养基上，将PDA培养基密封好，并置于28℃下黑暗倒扣培养2～3d；筛选出PDA培养基中具有抑菌圈的细菌菌落，即为叶斑病拮抗菌。本发明筛选方法大大缩小了筛选对象的范围，减少了工作量，降低了成本，对促进拮抗菌的筛选，加快生防菌的开发利用，具有重要的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 铁线莲 叶斑病 筛选 拮抗菌 致病菌 菌悬液 稀释液 水中 无菌 悬液 均匀涂布 梯度稀释 无菌滤纸 细菌菌落 研磨 生防菌 抑菌圈 菌落 影印 稀释 振荡 倒扣 制备 叶片 工作量 接种 密封 细菌 黑暗 应用 开发 | ||
【主权项】：
1.一种铁线莲叶斑病拮抗菌的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，致病菌悬液的制备：取带有叶斑的铁线莲叶片，切碎后置无菌生理盐水中，混合物溶液的浓度为20～25％，于一定温度下培养得到致病菌悬液；步骤2，取带有叶斑的铁线莲叶片，研磨后置于无菌水中，充分振荡后得到菌悬液；步骤3，取1mL步骤2的菌悬液加入99mL无菌水中，按1∶10进行梯度稀释，得到10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5的稀释液；取100μL不同稀释梯度的稀释液均匀涂布于LB培养基平板上进行培养；步骤4，用无菌滤纸在经步骤3培养后长出细菌的菌落上进行影印，然后接种至PDA培养基上培养，将步骤1的致病菌悬液喷至PDA培养基上，将PDA培养基密封好，并置于28℃下黑暗倒扣培养2～3d；步骤5，筛选出PDA培养基中具有抑菌圈的细菌菌落，即为叶斑病拮抗菌。
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