[发明专利]一种砂梨叶片高效再生体系的建立方法及其应用

摘要

本发明公开了一种砂梨叶片高效再生体系的建立方法及其应用，包括以下步骤：（1）取砂梨的带芽枝条进行消毒，将带叶芽的茎尖接种于继代培养基上生长，再将未感染苹果茎沟病毒（Apple stem grooving virus,ASGV）的离体植株叶片切成小块叶片；（2）将外植体叶片接种于再生培养基中暗处理后再转至光下培养，产生不定芽，所述的再生培养基以NN69营养液为基础，再添加3‑5mg/L 6‑BA+0.1‑0.2mg/L NAA+2.5g/L植物凝胶；（3）待不定芽长至0.5~1.2cm，将其侧芽切下，置于继代培养基上培养获得再生苗。上述方法获得的组培苗离体叶片为无菌叶片，可用于病菌致病性测定，不受季节限制，保障了试验结果成功率和准确性。

主权项

1.砂梨叶片高效再生体系的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体材料的获得：取砂梨的带芽枝条进行消毒，无菌条件下切取带叶芽的茎尖接种于继代培养基上生长，暗培养7‑10d后光照培养获得无菌的离体植株；再选取培养20‑30d的未感染苹果茎沟病毒（Apple stem grooving virus）的离体植株中、上部已伸展开的叶片，无菌条件下切成小块叶片作为诱导生芽的外植体材料；（2）分化及再生培养：将外植体叶片接种于再生培养基中暗处理14d~30d后再转至光下培养，产生不定芽；所述的再生培养基以NN69营养液为基础，再添加3‑5mg/L 6‑BA+0.1‑0.2mg/L NAA +2.5g/L植物凝胶；（3）不定芽继代培养扩繁：待不定芽长至0.5~1.2cm，将其侧芽切下，置于继代培养基上培养获得再生苗；所述的继代培养基为MS培养基+0.2mg/L IBA+1.0mg/L 6‑BA+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂，pH为5.8‑6.0。