[发明专利]一种鉴别CCoVI和CCoVII的双重纳米PCR检测方法有效
| 申请号： | 201810569666.7 | 申请日： | 2018-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN108676917B | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 崔尚金;秦彤 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京市诚辉律师事务所 11430 | 代理人： | 梁婧文 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种鉴别CCoVⅠ和CCoVⅡ的nanoRT‑PCR检测方法。通过对nanoRT‑PCR反应体系的引物、退火温度和引物浓度进行优化，获得CCoVⅠ和CCoVⅡ各自的目的条带的高效扩增，同时避免引物间的非特异性扩增；本发明所述nanoRT‑PCR检测方法的最低核酸检测量比普通RT‑PCR高100倍，且通过nanoRT‑PCR扩增得到与预期片段大小一致且序列完全正确的产物。本发明提供的用于鉴别CCoVⅠ和CCoVⅡ的nanoRT‑PCR方法具有极高的灵敏度和特异性，是一种高效的检测手段，可应用于犬冠状病毒病的流行性调查，同时也为CCoV的鉴定和防控奠定基础，具有重大的实际意义和价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 ccovi ccovii 双重 纳米 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
1.一种鉴别CCoVI和/或CCoVII的纳米PCR检测方法，其特征在于，所述方法使用引物CCoVⅠ‑F(SEQ ID NO.1)和CCoVⅠ‑R(SEQ ID NO.2)扩增CCoVI特异性片段，使用引物CCoVⅡ‑F(SEQ ID NO.3)和CCoVⅡ‑R(SEQ ID NO.4)扩增CCoVII特异性片段；扩增反应的退火温度为48℃；引物添加量分别为1.0μL/20μL反应体系，引物浓度为10μM。
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