[发明专利]体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型及其构建方法有效
| 申请号： | 201810570308.8 | 申请日： | 2018-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN108795872B | 公开（公告）日： | 2022-05-27 |
| 发明（设计）人： | 梁莉;王斐斐;朱孝辉;丁彦青 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10 |
| 代理公司： | 华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510515 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种肿瘤3D集体侵袭模型及其构建方法，制备肿瘤多细胞类器官团，细胞中含有光转换荧光蛋白，将其包被于I型鼠尾胶中进行3D培养，体外模拟肿瘤细胞的生长状态、增殖方式和侵袭方式，该模型研究的是肿瘤多细胞球体类器官的集体侵袭作用，更能模拟肿瘤细胞在体内集体侵袭方式，采用激光共聚焦显微镜进行光漂白后，可以在缺乏特异性生物学标记物的情况下对集体侵袭细胞中的Leader Cells与Follower Cells进行区分，并可通过荧光流式分选获得目的区域的肿瘤细胞进行后续实验研究。 | ||
| 搜索关键词： | 体外 肿瘤 细胞 集体 侵袭 模型 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种体外肿瘤细胞3D集体侵袭模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养得到肿瘤多细胞球体；所述肿瘤多细胞球体中的肿瘤细胞可表达光转换荧光蛋白；(2)向培养皿中加入I型鼠尾胶原与所述肿瘤多细胞球体的混合液；待凝固后，加入培养基、继续培养；(3)所述肿瘤多细胞球体在I型鼠尾胶原内伸展侵袭生长，至出现明显的集体侵袭细胞群时，使用激光共聚焦显微镜对所需区域的肿瘤细胞进行激光漂白荧光蛋白光转化，使所需区域的肿瘤细胞中的光转换荧光蛋白由绿色荧光转换为红色荧光；(4)加入胶原酶消化、离心、重悬，制得细胞悬液；(5)流式细胞仪分选以获得所需区域的肿瘤细胞。
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