[发明专利]一种快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其步骤包括：生物被膜生长阶段；抗生素压力阶段；生物被膜恢复阶段。此方法利用微量接种针为载体建立革兰氏阴性菌例如大肠杆菌生物被膜的体外模型，测定抗生素例如多粘菌素对大肠杆菌生物被膜的最低抑制浓度(BIC)和最小生物膜清除浓度(MBEC)。微生物形成生物被膜后，对粘菌素的耐药程度增加，其BIC和MBEC值均增加，且MBEC值大于BIC值。本研究中建立的大肠杆菌生物被膜体外形成实验，与其它方法相比，具有操作简单，易于重复等特点；同时配套设备少，技术要求低，可减少人为因素等误差；适用于较大样本。使得为临床上合理用药提供理论依据。

主权项

1.一种快速测定生物被膜中大肠杆菌对抗生素耐药性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)生物被膜构建：大肠杆菌培养后调节浓度至OD600＝0.45～0.5，加到微孔板内，将接种针固定在盖板上，并将盖板固定在微孔板上，使接种针插入微孔板内的菌液中，每个微孔内菌液体积为100～200μL；36～38℃、100～120rpm条件下培养18～30小时，在接种针上形成细菌生物被膜；(2)抗生素压力测试：配制不同浓度抗生素的药敏板，以空白菌液孔作为对照，取出步骤(1)中附有细菌生物被膜的接种针，冲洗后，压入含有不同浓度抗生素的药敏板内，36～38℃下静置培养18～30小时；读取此过程中的光密度值，以确定生物被膜最低抑制浓度；(3)生物被膜恢复：取出接种针洗涤后转入含有培养基的微孔板中，低速离心或超声震荡使生物被膜剥离到培养基中；移除接种针，36～38℃下静置培养18～30小时；读取此过程中的光密度值，以确定生物被膜最小清除浓度。