[发明专利]肝移植中HLA-C1/C2基因PCR-SSP快速鉴定方法

摘要

本发明基于HLA‑C1/C2基因的序列特征和HLA‑C基因组全长序列的单核苷酸多态性(SNPs)，采用HLA‑C位点特异性PCR引物和HLA‑C1/C2组特异性引物扩增策略，即设计一条共用的HLA‑C基因特异性PCR扩增引物，分别与一条针对HLA‑C1的组特异性PCR引物、一条针对HLA‑C2的组特异性PCR引物进行配组，仅用2个PCR反应分别扩增HLA‑C1、C2基因；由于所用引物具有相近的退火温度，可在同一PCR扩增条件下进行同步扩增；扩增产物经琼脂糖电泳检测，可清晰直观地判定受检者的HLA‑C1/C2基因型，无需大型贵重设备、无需对当前国际上IMGT/HLA数据库已公布的3800余种HLA‑C等位基因进行基因分型；具有实验操作简单、所需时间短、成本低，适合于肝移植前对肝供体进行快速检测，以减少急性排斥、提高移植效果。

主权项

1.肝移植中HLA‑C1/C2基因PCR‑SSP快速鉴定方法，其特征在于：采用一条HLA‑C基因特异性PCR扩增引物，分别与一条针对HLA‑C1的组特异性PCR引物、一条针对HLA‑C2的组特异性PCR引物配组，在同一PCR扩增条件下分别特异性扩增HLA‑C1及HLA‑C2基因；所述HLA‑C1基因特异性PCR扩增引物包括：上游引物HLA‑C‑F2和下游引物HLA‑C1‑RD，其中，所述上游引物HLA‑C‑F2的序列为：5'‑CCAATCAGCGTCTMCGCAGTC‑3'，位于5’‑启动子区域，在HLA‑C基因组全长序列中的位置为：nt‑77～nt‑57；所述下游引物HLA‑C1‑RD的序列为：5'‑TCTGGTTGTAGTAGCCGCGCAGG‑3'，位于第2外显子，在HLA‑C基因组全长序列中的位置为：nt442～nt464；所述HLA‑C2基因特异性PCR扩增引物包括上游引物HLA‑C‑F2和下游引物HLA‑C2‑RB，其中，所述上游引物HLA‑C‑F2的序列为：5'‑CCAATCAGCGTCTMCGCAGTC‑3'，位于5’‑启动子区域，在HLA‑C基因组全长序列中的位置为：nt‑77～nt‑57；所述下游引物HLA‑C2‑RB的序列为：5'‑TCTGGTTGTAGTAGCCGCGCAGT‑3'，位于第2外显子，在HLA‑C基因组全长序列中的位置为：nt442～nt464。