[发明专利]一种寄生蜂气味结合蛋白及其制备方法在审
| 申请号： | 201810591972.0 | 申请日： | 2018-06-08 |
| 公开（公告）号： | CN108752448A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 季香云;杨安;蒋杰贤;张浩;万年峰;陈义娟;姚英娟 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 许伯严 |
| 地址： | 201403 上海市奉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种寄生蜂气味结合蛋白及其制备方法。寄生蜂气味结合蛋白的制备方法包括以下步骤：一、淡足侧沟茧蜂气味结合蛋白基因的获得，包括（1）提取淡足侧沟茧蜂成蜂的总RNA，然后合成第一链cDNA；（2）设计扩增淡足侧沟茧蜂寄生蜂气味结合蛋白MpOBP8的引物；（3）将目的片段进行双酶切后，对酶切产物进行纯化；（4）将重组质粒转化到表达感受态细胞BL21(DE3)中，之后进行培养；二、重组蛋白表达条件的优化；三、目的蛋白的分离纯化，包括菌体的收集、破碎；目的蛋白的分离纯化和浓缩。本发明得到的可溶性寄生蜂气味结合蛋白质量稳定可靠，对于研究其识别机制具有重要意义，具有较好的市场价值和社会价值。 | ||
| 搜索关键词： | 气味结合蛋白 寄生蜂 淡足侧沟茧蜂 制备 分离纯化 目的蛋白 重组蛋白表达 重组质粒转化 第一链cDNA 感受态细胞 酶切产物 目的片段 质量稳定 重要意义 双酶切 总RNA 成蜂 菌体 扩增 引物 破碎 合成 浓缩 基因 优化 研究 | ||
【主权项】：
1.一种寄生蜂气味结合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取淡足侧沟茧蜂成蜂的总RNA，然后合成第一链cDNA；(2)设计扩增淡足侧沟茧蜂寄生蜂气味结合蛋白MpOBP8的引物；并在正、反向引物中分别引入BamH Ⅰ和Hind Ⅲ限制酶切位点核酸序列；正向引物序列：5′‑CGCGCGGGATCCATGGATTCAAATATAAAATATAT‑3′；反向引物序列：5′‑CGCGCGAAGCTTCTACTGGGTCATTTTCAGAGGC‑3′；以淡足侧沟茧蜂成蜂触角cDNA第一链为模板进行PCR扩增，PCR产物经凝胶电泳，回收目的片段；(3)将目的片段用内切酶Hind Ⅲ和BamH Ⅰ进行双酶切后，对酶切产物进行纯化；同时将pET32a(+)质粒用Hind Ⅲ和BamH Ⅰ进行双酶切和纯化；纯化后的酶切产物在T4DNA Ligase体系下过夜连接；连接产物转化感受态菌株Trans1‑T1并测序，将测序正确的样品提取质粒；(4)将重组质粒转化到表达感受态细胞BL21(DE3)中，之后接种于LB培养基中培养；然后再转接于LB培养基中；且做空载体pET32a(+)质粒转化到表达感受态细胞BL21(DE3)的对照；(5)重组蛋白表达条件的优化；(6)目的蛋白的分离纯化；即得寄生蜂气味结合蛋白MpOBP8。
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