[发明专利]一种检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法

摘要

本发明公开了一种用于检测畜禽粪便样本中多种真菌毒素的方法，将样本经β‑葡萄糖醛酸酶酶解之后，经乙腈/水溶液（84/16，v/v,含10%NaCl）超声提取、离心、浓缩、复溶后直接在TQS三重四级杆液相色谱串联质谱仪中以甲醇和5 mmol/L醋酸铵的水溶液（含0.1%甲酸）作为流动相进行梯度洗脱分析，15种真菌毒素能够达到有效分离。本发明的方法没有复杂的衍生净化步骤，具有简便快捷、经济高效的特点，能够同时快速地检测样本中多种真菌毒素，可有效检测样本中的真菌毒素残留量。

主权项

1.一种用于检测样本中真菌毒素的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样本前处理：A、将待测样本在冷冻干燥机中干燥后使用高速粉碎机粉碎混匀，‑20℃冻存或直接进入下一步；B、酶解：称取粉碎后的样本于离心管中，加入酶缓冲液，涡旋混匀后振荡酶解，优选地，称取粉碎后的样本1.00～5.00g，更优选地，称取粉碎后的样本2.00～3.00g，最优选地，称取粉碎后的样本2.00g，优选地，所述离心管为具塞离心管，更优选地，所述离心管体积为30～100mL，更优选地，所述离心管为40～60mL，最优选地，所述离心管为50mL，所述酶缓冲液为β‑葡萄糖醛酸酶缓冲液，优选地，所述酶缓冲液加入量为5～30μL，更优选地，所述酶缓冲液加入量为8～15μL，最优选地，所述酶缓冲液加入量为10μL；C、振荡超声提取：在酶解后的样本中加入提取溶剂，涡旋振荡，超声萃取，优选地，所述涡旋振荡的时间为1～10min，更优选地，所述涡旋振荡的时间为3～8min，最优选地，所述涡旋振荡时间为5min；D、离心浓缩：将超声提取的样本离心，转移上清液在水浴下氮气吹干，残渣用提取试剂定容至1mL，并超声帮助复溶，涡旋，优选地，所述离心的转速为3000～6000rpm，更优选地，所述离心的转速为4000～5000rpm，最优选地，所以离心的转速为4500rpm，优选地，所述离心的时间为5～20min，更优选地，所述离心的时间为8～15min，最优选地，所述离心的时间为10min，优选地，所述转移上清液的体积为1～10mL，更优选地，所述转移上清液的体积为3～7mL，最优选地，所述转移上清液的体积为5mL，优选地，所述水浴的温度为30～60℃，更优选地，所述水浴的温度为40～50℃，最优选地，所述水浴的温度为45℃，优选地，所述超声的时间为0.2～1min，更优选地，所述超声的时间为0.3～0.7min，最优选地，所述超声的时间为0.5min；E、过滤分析：将复溶得到的溶液过有机滤膜后待测，优选地，所述滤膜的孔径为0.1～0.5μm，更优选地，所述滤膜的孔径为0.2μm；(2)将待测液在TQS三重四级杆液相色谱串联质谱仪中进行梯度洗脱分析，色谱条件如下：Agilent Poroshell 120，EC‑C18色谱柱(2.7μm，3.0mm×100mm)；流动相A为甲醇；流动相B为醋酸铵水溶液，所述醋酸铵水溶液的浓度为1～10mmol/L，优选地，所述醋酸铵水溶液的浓度为3～7mmol/L，更优选地，所述醋酸铵水溶液的浓度为5mmol/L；流速为0.2～0.6mL/min，优选地，流速为0.3～0.5mL/min，更优选地，流速为0.4mL/min；进样量1～5μL，优选地，上样量为2～4μL，更优选地，上样量为3μL；柱温20～60℃，优选地，柱温为30‑50℃，更优选地，柱温为40℃，质谱条件如下：雾化气压采用电喷雾ESI﹢和ESI﹣离子源；质谱分析范围m/z 200～800；喷雾电压：3.0kV(ESI﹢)和2.5kV(ESI﹣)；离子源温度150℃；脱溶剂气温度500℃；锥孔反吹气流量150L/h；脱溶剂气流量1000L/h；碰撞池压力7.0bar；多反应离子监测(MRM)采集。