[发明专利]8种β-内酰胺类抗生素耐药基因荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种8种β‑内酰胺类抗生素耐药基因荧光定量PCR检测方法。本发明针对8类β‑内酰胺类抗菌药物耐药基因(bla_OXA‑1like、bla_VIM‑2like、bla_KPC、bla_NDM、bla_{CTX‑M‑15like}、bla_{TEM‑198like}、bla_CMY‑2like和bla_{CTX‑M‑9like})建立了相应荧光定量PCR方法，该检测方法适用于可培养菌和不可培养菌，并且PCR反应条件相同，从而保证了在同一PCR条件下可以对样品中这8种β‑内酰胺类抗生素耐药基因进行同时检测，对于环境中β‑内酰胺类抗生素耐药性的监测具有重要意义。

主权项

1.引物组合甲，由引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、引物对Ⅴ、引物对Ⅵ、引物对Ⅶ和引物对Ⅷ组成；所述引物对Ⅰ由引物NDM‑F和引物NDM‑R组成；所述引物NDM‑F为如下(a1)或(a2):(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述NDM‑R为如下(a3)或(a4):(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅱ由引物VIM‑F和引物VIM‑R组成；所述引物VIM‑F为如下(b1)或(b2):(b1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物VIM‑R为如下(b3)或(b4):(b3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅲ由引物KPC‑F和引物KPC‑R组成；所述引物KPC‑F为如下(c1)或(c2):(c1)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(c2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物KPC‑R为如下(c3)或(c4):(c3)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(c4)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅳ由引物CTX‑M‑15‑F和引物CTX‑M‑15‑R组成；所述引物CTX‑M‑15‑F为如下(d1)或(d2):(d1)序列表的序列7所示的单链DNA分子；(d2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列7具有相同功能的DNA分子；所述引物CTX‑M‑15‑R为如下(d3)或(d4):(d3)序列表的序列8所示的单链DNA分子；(d4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列8具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅴ由引物CTX‑M‑9‑F和引物CTX‑M‑9‑R组成；所述引物CTX‑M‑9‑F为如下(e1)或(e2):(e1)序列表的序列9所示的单链DNA分子；(e2)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列9具有相同功能的DNA分子；所述引物CTX‑M‑9‑R为如下(e3)或(e4):(e3)序列表的序列10所示的单链DNA分子；(e4)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列10具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅵ由引物OXA‑1‑F和引物OXA‑1‑R组成；所述引物OXA‑1‑F为如下(f1)或(f2):(f1)序列表的序列11所示的单链DNA分子；(f2)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列11具有相同功能的DNA分子；所述引物OXA‑1‑R为如下(f3)或(f4):(f3)序列表的序列12所示的单链DNA分子；(f4)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列12具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅶ由引物TEM‑F和引物TEM‑R组成；所述引物TEM‑F为如下(g1)或(g2):(g1)序列表的序列13所示的单链DNA分子；(g2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列13具有相同功能的DNA分子；所述引物TEM‑R为如下(g3)或(g4):(g3)序列表的序列14所示的单链DNA分子；(g4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列14具有相同功能的DNA分子；所述引物对Ⅷ由引物CMY‑F和引物CMY‑R组成；所述引物CMY‑F为如下(h1)或(h2):(h1)序列表的序列15所示的单链DNA分子；(h2)将序列15经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列15具有相同功能的DNA分子；所述引物CMY‑R为如下(h3)或(h4):(h3)序列表的序列16所示的单链DNA分子；(h4)将序列16经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列16具有相同功能的DNA分子。