[发明专利]一种大通量筛选植物病毒复制必需寄主基因的方法在审
| 申请号： | 201810631815.8 | 申请日： | 2018-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN108753815A | 公开（公告）日： | 2018-11-06 |
| 发明（设计）人： | 程晓非;武晓云 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 一种大通量筛选植物病毒复制必需寄主基因的方法，属于基因工程技术领域。本发明针对目前侵染性克隆构建方法中病毒侵染效率低，基因表达难控制的问题，本发明提供了一种大通量筛选植物病毒复制必需寄主基因的方法，具体是利用诱导型启动子构建诱导型病毒侵染性克隆，通过农杆菌介导转化植物，用转基因植物构建突变体库，待突变体发芽后，利用诱导剂诱导病毒侵染，进行突变体的筛选，得到病毒不能被诱导的突变体植物，再结合图位克隆和全基因组测序的方法定位并克隆植物病毒复制必需寄主基因，本发明适用于一次性大通量筛选植物病毒复制必需寄主基因。 | ||
| 搜索关键词： | 寄主 病毒复制 筛选植物 基因 病毒侵染 突变体 构建 诱导 农杆菌介导转化 转基因植物构建 基因工程技术 诱导型启动子 病毒侵染性 侵染性克隆 突变体植物 基因表达 克隆植物 全基因组 突变体库 图位克隆 一次性 诱导剂 诱导型 测序 发芽 克隆 病毒 筛选 | ||
【主权项】：
1.一种大通量筛选植物病毒复制必需寄主基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)诱导型病毒侵染性克隆的构建：所述表达载体包含农杆菌T‑DNA左边界序列、农杆菌T‑DNA右边界序列、诱导型启动子、植物正义RNA病毒全长cDNA、真核转录终止子、大肠杆菌和农杆菌复制必需元件和抗性筛选基因，其中，植物正义RNA病毒全长cDNA位于诱导型启动子和真核转录终止子序列之间，农杆菌T‑DNA右边界序列位于诱导型启动子上游，农杆菌T‑DNA左边界序列位于真核转录终止子下游；获得的诱导型病毒侵染性克隆转化大肠杆菌宿主菌中，获得阳性转化子；2)诱导型病毒侵染性克隆的遗传转化：将步骤1)获得的阳性转化子导入农杆菌，然后将诱导型病毒侵染性克隆转入植物体内，获得转基因植物；3)植物病毒复制必需基因的大通量筛选：用转基因植物构建突变体库，突变体发芽后，利用诱导剂诱导病毒侵染，进行突变体的筛选，得到病毒不能被诱导的突变体植物，结合图位克隆和全基因组测序的方法确定筛选的植物病毒复制必需基因。
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