[发明专利]一种sgRNA的体外合成方法及其试剂盒有效
| 申请号： | 201810634615.8 | 申请日： | 2018-06-20 |
| 公开（公告）号： | CN108330138B | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 朱化星;张清仪;石加加;赵曼曼;何翼 | 申请（专利权）人： | 上海欣百诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/10;C12N15/113;C12N9/22 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 王正君;徐迅 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种sgRNA的体外合成方法及其试剂盒，具体地，本发明提供了具有5’‑3’的式I所示的结构的核酸构建物：Y1‑L1‑Y2‑L2‑Y3‑Y4 (I)，其中，Y1为RNA聚合酶启动区；L1为无或连接序列；Y2为靶DNA序列；L2为无或连接序列；Y3为下游引物结合区；Y4为无或核苷酸序列；并且，各“‑”独立地为键或核苷酸连接序列。本发明的sgRNA合成体系可显著提高sgRNA的合成产量，并且可以将整个流程时间大幅缩短，步骤简便，平均费用也大大下降。 | ||
| 搜索关键词： | 连接序列 体外合成 试剂盒 核酸构建物 核苷酸序列 靶DNA序列 合成体系 下游引物 核苷酸 结合区 启动区 合成 | ||
【主权项】：
1.一种sgRNA合成体系，其特征在于，所述的sgRNA合成体系是sgRNA体外一步转录合成反应的合成体系，并且所述体系包括：(a)核酸构建物，所述核酸构建物具有5’‑3’的式I所示的结构：Y1‑L1‑Y2‑L2‑Y3‑Y4 (I)其中，Y1为RNA聚合酶启动区；L1为无或连接序列；Y2为靶DNA序列；L2为无或连接序列；Y3为下游引物结合区；Y4为无或核苷酸序列；并且，各“‑”独立地为键或核苷酸连接序列；(b)下游引物；(c)DNA聚合酶；和(d)RNA聚合酶；其中,所述元件Y3的长度为5‑30bp。
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