[发明专利]一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备及其应用方法

摘要

本发明公开了一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备及其应用方法，该方法为实现多样本的繁殖障碍性病毒病一次性筛查检测奠定了基础，同时有效解决了传统方法费时费力、敏感性低、投入大的缺陷。本发明的技术方案如下：基于五种病毒的保守序列利用生物学软件设计特异性引物与探针，用TE Buffer溶解合成好的探针，在基因芯片点样仪上按预先设定好的程序在醛基化基片上喷点式点样，制备用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病的芯片。本发明的使用方法是：提取待测样品的基因组DNA/RNA，利用多重PCR反应体系制备杂交用PCR产物，与制备好的基因芯片杂交，经洗涤与干燥后，将芯片置于激光共聚焦扫描仪上扫描，分析结果，大大节省了时间，检测成本低。

主权项

1.一种用于检测猪五种繁殖障碍性病毒病基因芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)设计引物和探针：以CSFV、PPV、PRRSV、JEV及PCV2的保守基因设计特异性引物与探针序列如下：CSFV的引物及探针序列为：F:5’‑TGCAACTGAATGACGGGAC‑3’R:5’‑Cy3‑GCCAAATACCTCCTACTGACCAC‑3’P:NH2‑TTTTTTTTTTCGTGGCAGGTTCCTTTAAAGTCAGCPPV的引物及探针序列为：F:5’‑AAAAACAATCCACCAGGACAAC‑3’R:5’‑Cy3‑CTGGATCTCATTTTTGCTGTGA‑3’P:NH2‑TTTTTTTTTTGATTTCAATGACTCTCCTCAACAACCPRRSV的引物及探针序列为：F:5’‑CGGGCGGTATGTCCTAAGTA‑3’R:5’‑Cy3‑ACCTCAACTTTGCCCCTTTT‑3’P:NH2‑TTTTTTTTTTTGCGTTGACTTGCTTCGTCATTAGGTCJEV的引物及探针序列为：F:5’‑AGCTTGTTGGACGGCAGAG‑3’R:5’‑Cy3‑GCCACATGATTGAGCCTTCA‑3’P:NH2‑TTTTTTTTTTCCGATGGAAAGCAGGAAAGCAGTGGAAAAGAGTGTPCV2的引物及探针序列为：F:5’‑CTATCAAGCGAACCACAGT‑3’R:5’‑Cy3‑GGTCTACATTTCCAGCAGT‑3’P:NH2‑TTTTTTTTTTTTTTTTCACAGCCCTCACCTATAGCCCCTATTG，在每段探针下游5’端都进行Cy3荧光标记，探针的5’端氨基化修饰，并在氨基和探针之间加上10‑15个T；2)按常规方法对引物和探针进行合成；3)基因芯片的制备：用TE Buffer溶解合成好的探针，用基因芯片点样仪按预先设定好的程序在醛基化基片上接触式点样，点样完毕后将芯片静置于80℃烘箱固定干燥2小时。