[发明专利]一种在大肠杆菌中利用果糖合成D-塔格糖的方法在审
| 申请号： | 201810665123.5 | 申请日： | 2018-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN108795962A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 夏文豪;陈贤情;蒿飞;杨月;王筱;王文 | 申请（专利权）人： | 嘉兴欣贝莱生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P19/02 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙) 11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 314000 浙江省嘉兴市南湖区昌盛*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种在大肠杆菌中利用果糖合成D‑塔格糖的方法，步骤如下：1)将FbaA的密码子以及基因HXK的密码子构建在质粒pET28a上，得到重组质粒1，重组质粒1上带有大肠杆菌的卡那霉素抗性基因；2)将根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因appA的密码子构建在质粒pET22b上，得到重组质粒2，重组质粒上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因；3)敲除大肠杆菌中的T6P的糖磷酸转运蛋白UhpT，得到ΔUhpT的大肠杆菌的菌株；4)将上述重组质粒1和重组质粒2同时转入经过改造的菌株中，根据卡那霉素抗性基因和氨苄霉素抗性基因筛选阳性克隆，得到最终的发酵菌株；5)全细胞催化合成塔格糖。本发明在微生物体内进行生物酶的催化合成，生产成本和对环境友好方面容易控制。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 重组质粒 密码子 氨苄霉素抗性基因 卡那霉素抗性基因 构建 果糖 菌株 质粒 合成 大肠杆菌密码子 偏好性优化 全细胞催化 催化合成 发酵菌株 环境友好 阳性克隆 转运蛋白 合成塔 生物酶 塔格糖 糖磷酸 基因 敲除 生产成本 微生物 体内 筛选 转入 改造 | ||
【主权项】：
1.一种在大肠杆菌中利用果糖合成D‑塔格糖的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：1)将根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因FbaA的密码子以及基因HXK的密码子构建在质粒pET28a上，得到重组质粒1，重组质粒1pET28a‑HXK&FbaAs上带有大肠杆菌的卡那霉素抗性基因；2)将根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因appA的密码子构建在质粒pET22b上，得到重组质粒2，重组质粒2pET22b‑appA上带有大肠杆菌的氨苄霉素抗性基因；3)敲除大肠杆菌中的T6P的糖磷酸转运蛋白UhpT，得到ΔUhpT的大肠杆菌的菌株Taga‑ΔUhpT；4)将上述重组质粒1和重组质粒2同时转入经过改造的Taga‑ΔUhpT菌株中，根据卡那霉素抗性基因和氨苄霉素抗性基因筛选阳性克隆，然后提取大肠杆菌的质粒进行PCR验证，得到最终的发酵菌株Taga‑ΔUhpT‑HXK‑FbaA‑appA；5)基于步骤4)发酵菌株Taga‑ΔUhpT‑HXK‑FbaA‑appA进行全细胞催化合成塔格糖。
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