[发明专利]一种人源视网膜色素上皮细胞的程序性降温冻存的方法及应用在审
| 申请号： | 201810694183.X | 申请日： | 2018-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN109864063A | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 方攀峰;张俊克;范国平;王云娟 | 申请（专利权）人： | 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/079 |
| 代理公司： | 上海麦其知识产权代理事务所(普通合伙) 31257 | 代理人： | 董红曼 |
| 地址： | 214028 江苏省无锡市新*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种人源视网膜色素上皮细胞(RPE)的程序性降温冻存的方法，属于生物医学技术领域。所述方法包括：(1)成熟RPE细胞的消化处理：对培养成熟的人源视网膜色素上皮细胞RPE细胞采用酶消化法进行收集，计数，用冻存液重悬细胞，分装至冻存管；(2)将所述冻存管转移至程序性降温仪中进行冷冻冻存；(3)获得冻存的人源视网膜色素上皮细胞。本发明方法通过使用程序性降温仪按特定的降温程序对人源视网膜色素上皮细胞进行冻存。本发明利用不同降温程序冻存RPE细胞，进而摸索最佳的冻存程序。本发明提供的人源视网膜色素上皮细胞的冻存方法为短期或者长期保存，以及今后使用的RPE细胞治疗AMD(老年黄斑变性)等RPE损伤疾病提供了新来源。 | ||
| 搜索关键词： | 冻存 视网膜色素上皮细胞 人源 降温程序 冻存管 降温仪 老年黄斑变性 生物医学技术 长期保存 酶消化法 消化处理 冻存液 分装 重悬 成熟 冷冻 损伤 细胞 疾病 治疗 应用 | ||
【主权项】：
1.一种人源视网膜色素上皮细胞的冻存方法，其特征在于，所述冻存方法包括如下步骤：(1)成熟RPE细胞的消化处理：对培养成熟的人源视网膜色素上皮细胞RPE细胞采用酶消化法进行收集，计数，用冻存液重悬细胞，分装至冻存管；(2)将所述冻存管转移至程序性降温仪中进行冷冻冻存；(3)获得目的产物即冻存的人源视网膜色素上皮细胞；其中，步骤(2)中，所述冷冻冻存的程序包括第一阶段：以1.0℃‑2.0℃/分的速率降温直至样品温度达到‑5.0℃～‑10℃；以25.0℃‑40.0℃/分的速率降温直至腔室温度达到‑40.0℃～‑60.0℃。
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