[发明专利]一种定量检测产2-甲基异莰醇菌株的方法及装置在审
| 申请号： | 201810724287.0 | 申请日： | 2018-07-04 |
| 公开（公告）号： | CN108796102A | 公开（公告）日： | 2018-11-13 |
| 发明（设计）人： | 陈蕾;姜蕾 | 申请（专利权）人： | 上海城市水资源开发利用国家工程中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海国智知识产权代理事务所(普通合伙) 31274 | 代理人： | 潘建玲 |
| 地址： | 200082 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种定量检测产2‑甲基异莰醇菌株的方法及装置，该方法包括：取地表水水样，经过微孔过滤后，将滤膜进行总DNA提取纯化，得到DNA样本；以获得的DNA样本为模板进行PCR扩增；对PCR扩增产物进行纯化；将纯化后的DNA进行质粒转化过程，获得转化了质粒的白色菌落；选取饱满的单菌落接种于培养液中振荡培养过夜，以用于菌液PCR鉴定和测序分析；将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒，测定质粒浓度后梯度稀释，将稀释后的质粒作为标准样品，建立标准样品浓度与临界循环数对应的标准曲线；取之前得到的DNA样本作为模板，进行定量PCR测定获得待测样本，根据所述标准曲线确定待测样本中产2‑甲基异莰醇菌株的浓度。 | ||
| 搜索关键词： | 质粒 菌株 白色菌落 标准样品 待测样本 定量检测 培养液 标准曲线确定 临界循环数 总DNA提取 标准曲线 测序分析 鉴定分析 梯度稀释 微孔过滤 振荡培养 质粒转化 定量PCR 单菌落 菌液 滤膜 水样 稀释 地表水 接种 转化 | ||
【主权项】：
1.一种定量检测产2‑甲基异莰醇菌株的方法，包括如下步骤：步骤一，取地表水水样，经过微孔过滤后，将滤膜进行总DNA提取纯化，得到DNA样本；步骤二，以步骤一获得的DNA样本为模板进行PCR扩增；步骤三，对PCR扩增产物进行纯化；步骤四，将纯化后的DNA进行质粒转化过程，获得转化了质粒的白色菌落；步骤五，选取饱满的单菌落接种于培养液中，并振荡培养过夜，以用于菌液PCR鉴定和测序分析；步骤六，将经过鉴定分析的白色菌落提取质粒，测定质粒浓度后，梯度稀释，将稀释后的质粒作为标准样品，建立标准样品的浓度与临界循环数对应的一元线性回归曲线，即得到标准曲线；步骤七，取步骤一中得到的DNA样本作为模板，进行定量PCR测定获得待测样本，根据所述标准曲线确定待测样本中产2‑甲基异莰醇菌株的浓度。
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