[发明专利]一种低丰度突变DNA的Loop式富集检测引物及其应用

摘要

本发明涉及生物技术领域，公开了一种低丰度突变DNA的Loop式富集检测引物及其应用。本发明通过一段Loop式结构连接两段短的核苷酸序列，利用碱基堆积作用达到突变型和野生型的差异扩增，可将浓度低至万分之一的突变富集至百分之一～十分之一，达到Sanger测序的检测范围，使其可与Sanger测序相结合进行低丰度突变的检测。本发明适用于突变含量低的外周血游离DNA的检测，具有采样简单、方便，对病患造成的痛苦少，该检测技术具有特异性好、灵敏度度高、操作简单，检测周期短，检测成本低等优点。

主权项

1.一种低丰度突变DNA的Loop式富集检测引物，其特征在于，包括上游引物，所述上游引物由辅助引物、连接序列和扩增引物组成，所述辅助引物、连接序列和扩增引物依次连接；所述辅助引物长度为11‑16nt，其上设计有所述突变DNA的突变位点，所述辅助引物与所述突变DNA可完全互补配对，并与所述突变DNA相对应的野生DNA有一个突变碱基的不匹配；所述扩增引物长度为10‑14nt，与所述突变DNA和野生DNA均可完全匹配；所述辅助引物Tm值高于扩增引物Tm值3℃以上；所述富集检测引物与所述突变DNA结合时，所述扩增引物结合区域位于所述辅助引物结合区域的上游，且所述辅助引物的5’末端与所述扩增引物的3’末端在所述突变DNA上的结合位置间隔0‑5个碱基；所述连接序列与所述突变DNA和野生DNA均不结合。