[发明专利]农杆菌介导的小麦矮腥黑粉菌转化方法

摘要

本发明涉及小麦矮腥黑粉菌的遗传转化，具体涉及农杆菌介导的小麦矮腥黑粉菌转化方法。包括：培养TCK冬孢子，当萌发率≥60％时收集菌丝，配制1×106个/ml的菌丝液；将农杆菌接种于LB培养基中，28℃振荡培养2‑3d，用IM培养基稀释至OD600为0.15‑0.35，继续培养7‑8h，用IM培养基稀释至OD600为0.53‑0.59；在CM培养基上铺一层无菌玻璃纸，将农杆菌菌液与菌丝液等体积混合后涂布于玻璃纸上，20‑22℃黑暗培养48h；然后将玻璃纸转移至新的CM培养基上，使涂布有菌液的一面贴合培养基，5℃黑暗培养至菌落长出。该方法能够将外源基因成功转入小麦矮腥黑粉菌基因组中并稳定遗传。

主权项

1.农杆菌介导的小麦矮腥黑粉菌转化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)菌丝液制备：培养小麦矮腥黑粉菌冬孢子，当冬孢子萌发率≥60％时收集菌丝，离心去上清液，然后用灭菌水配制浓度为1×106个/ml的菌丝液；(2)农杆菌菌液制备：将含有表达载体的农杆菌接种于LB液体培养基中，28℃振荡培养2‑3d，用IM培养基稀释菌液至OD600为0.15‑0.35，继续振荡培养7‑8h，然后用IM培养基稀释菌液至OD600为0.53‑0.59；(3)在CM固体培养基上铺一层无菌玻璃纸，将OD600为0.53‑0.59的农杆菌菌液与1×106个/ml的菌丝液等体积混合后涂布于玻璃纸上，置于20‑22℃黑暗培养48h；然后将玻璃纸转移至新的CM固体培养基上，使涂布有菌液的一面贴合培养基，5℃黑暗培养至菌落长出。