[发明专利]一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法在审
| 申请号： | 201810782239.7 | 申请日： | 2018-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN109055295A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 胥猛;徐梦璇;杨章旗;徐立安;冯源恒 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学;广西壮族自治区林业科学研究院 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82 |
| 代理公司： | 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 210037 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法，首先使用组合酶将马尾松针叶细胞酶解成原生质体，得到的原生质体经分离、纯化和预处理后，利用PEG法将携带GFP标签的空载体转入马尾松原生质体中，经过培养，使得空载体在原生质体中表达。本发明构建得到马尾松原生质体瞬时表达系统，易于操作和实现，该方法的转化效率可达60％，为马尾松功能基因研究提供了快速便捷的研究平台。本发明所使用的酶解体系适用于马尾松实生苗，利用幼嫩的针叶可得到较高质量的原生质体，原生质体活力可达80％以上，对于野外的成熟叶组织也适用。 | ||
| 搜索关键词： | 原生质体 马尾松 马尾松针叶 原生质体分离 高效转化 预处理 瞬时表达系统 原生质体活力 功能基因 酶解体系 转化效率 成熟叶 空载体 实生苗 细胞酶 组合酶 构建 针叶 标签 野外 转入 携带 研究 | ||
【主权项】：
1.一种马尾松针叶原生质体分离纯化以及瞬时高效转化的方法，其特征在于，首先使用组合酶将马尾松针叶酶解成原生质体，得到的原生质体经分离、纯化和预处理后，利用PEG法将携带GFP标签的空载体转入马尾松原生质体中，经过培养，使得空载体在原生质体中表达。
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