[发明专利]一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法在审
| 申请号： | 201810798857.0 | 申请日： | 2018-07-19 |
| 公开（公告）号： | CN108827741A | 公开（公告）日： | 2018-11-16 |
| 发明（设计）人： | 屈海泳;李坤;马春晖;高超;王永章 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 黄启法 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，属于花粉管加载荧光染料技术领域。所述利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，包括如下步骤：步骤1：原料预处理；步骤2：制备Fluo 4‑AM母液；步骤3：制备花粉悬浮液；步骤4：制备Fluo 4‑AM工作液；步骤5：制备加载荧光染料的花粉管。本发明在不影响花粉细胞结构和活性的情况下，采用负压渗透及染色剂染色，在低温下对花粉管进行处理，能够对花粉管中钙离子成功染色。 | ||
| 搜索关键词： | 花粉管 荧光染料 加载 负压 制备 染色 花粉悬浮液 原料预处理 花粉细胞 钙离子 工作液 染色剂 母液 成功 | ||
【主权项】：
1.一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：原料预处理在丰水梨花期，采集铃铛状的花朵，取下成熟花药，待花药开裂后收集花粉，于‑20℃条件下密闭保存；步骤2：制备Fluo 4‑AM母液将50μg的Fluo 4‑AM溶解在91.2μL的无水二甲基亚砜中，于‑20℃条件下避光密封保存，得到Fluo 4‑AM母液；步骤3：制备花粉悬浮液将步骤1中的‑20℃条件下密闭保存的花粉于常温放置1‑2h后，与培养液混匀至最终浓度为1×105‑1×107个花粉/mL，于25℃条件下培养0.5‑2h，得到花粉悬浮液；步骤4：制备Fluo 4‑AM工作液分别取1‑5μL步骤2得到的Fluo 4‑AM母液和10‑100μL步骤3得到的花粉悬浮液，混匀后，得到Fluo 4‑AM工作液；步骤5：制备加载荧光染料的花粉管将步骤4得到的Fluo 4‑AM工作液，于负压、低温条件下避光培养0.5‑2h，再离心，弃去上清，用培养液洗涤2‑3次，即得到加载荧光染料的花粉管。
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