[发明专利]一种基于数字PCR的阿胶及阿胶制品中阿胶成分的定量检测方法

摘要

本发明公开了一种基于数字PCR的阿胶及阿胶制品中阿胶成分的定量检测方法，属于分子生物学技术领域。该方法首先确定出在一定质量范围内阿胶质量与DNA浓度含量的线性关系以及在一定浓度范围内DNA质量含量与DNA绝对拷贝数的线性关系，以DNA含量为中间换算值，从而换算出阿胶质量与DNA绝对拷贝数的线性关系，利用ddPCR检测出待测样品的绝对拷贝数来确定阿胶及阿胶制品中阿胶的绝对含量。有益效果：本申请利用ddPCR对待测样品进行DNA拷贝数的精确计数，定量结果准确、高效、稳定，能有效对市售的各类阿胶产品进行定量检测和纯度鉴定，有较大的应用价值和应用前景，可有效预防阿胶掺假现象的发生。

主权项

1.一种基于数字PCR的阿胶及阿胶制品中阿胶成分的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤(1)纯品阿胶质量与DNA浓度含量测定及关系确定：分别提取不少于10个质量梯度的阿胶标准品DNA，每个质量梯度重复3次；并利用紫外分光光度核酸定量测定仪测定标准品DNA浓度，确定出在一定质量范围内的纯品阿胶质量与DNA浓度含量的线性关系，并列出纯品阿胶质量与DNA浓度含量关系方程式为y＝ax±b，相关系数需满足R2≥0.990，其中y是阿胶DNA浓度含量，单位ng/μL；x是纯品阿胶质量，单位mg；(2)阿胶DNA质量含量与目的基因拷贝数测定及关系确定：在数字PCR检测的浓度范围内，分别稀释至并选取10个质量梯度的阿胶标准品DNA进行数字PCR检测，每个浓度梯度重复3次；确定出在一定的阿胶DNA浓度范围内，DNA质量含量与目的基因拷贝数之间的线性关系，并列出关系方程式为Y＝cX±d，相关系数需满足R2≥0.990，其中Y是目的基因拷贝数，单位copies/μL；X为反应体系中阿胶DNA质量含量，单位ng；(3)纯品阿胶质量与目的基因拷贝数关系确定：根据步骤(1)确立的纯品阿胶质量与阿胶DNA浓度含量之间的关系，以及步骤(2)确立的阿胶DNA质量含量与目的基因拷贝数之间的关系，以阿胶DNA含量为中间过渡换算值，确定出纯品阿胶质量与目的基因拷贝数之间的线性关系，并列出关系方程式为M阿胶＝eC±f；其中，M阿胶为纯品阿胶质量，单位mg；C为每微升的目的基因拷贝数，单位copies/μL；DNA浓度含量和质量含量的中间过渡关系式为X＝v*y/n，其中v为扩增体系中DNA的上样体积，n为DNA模板的稀释倍数；(4)待测阿胶产品的定量确定：利用数字PCR检测待测样品中基因拷贝数，采用步骤(3)所述关系式换算出相应纯品的阿胶理论质量，所述阿胶的理论质量与进行DNA提取的阿胶总质量的比值即为待测阿胶的纯度。