[发明专利]一种人类粪便DNA提取方法

摘要

本发明提供一种简单快速、成本低、稳定性高的人粪便DNA提取方法。包括步骤一，粪便样品的采集；步骤二，粪便样品的运输；步骤三，粪便样品的取样；步骤四，粪便样本的DNA提取。本发明DNA提取过程方便快捷，所得DNA纯度与浓度符合要求，磁珠的应用可大大提高实验通量，可用于粪便DNA提取的自动化应用。

主权项

1.一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤一，粪便样品的采集：人排出粪便后，立即采集2‑5g粪便样品放入采集管中，采集管中装有10‑15mL粪便保存液，摇匀采集管使粪便样品与粪便保存液充分混匀；所述粪便保持液成分：0.3‑0.6M EDTA，3‑6M NaCl，0.3‑1.5M Tris；步骤二，粪便样品的运输：在常温或低温条件下常规物流运输采集的粪便样品，并在3天内到达实验室进行处理；步骤三，粪便样品的取样：粪便样品到达实验室后，充分混匀，吸取800μL‑2000μL粪便样本放入离心管中，再次混匀；步骤四，粪便样本的DNA提取：(1)细胞沉淀将装有粪便样本的离心管在10000‑13000rpm条件下离心2‑5分钟，保留沉淀，去除上清液；(2)细胞裂解释放DNA向步骤(1)的离心管中加入800‑1000μL粪便裂解液，使其与沉淀彻底混匀后，在68‑75℃条件下温育10分钟；所述粪便裂解液成分：0.5‑1.2％(m/v)CTAB，0.8‑1.4MNaCl，0.08‑0.12％(m/v)Tris，10‑15mM EDTA，0.1‑0.2M异巯基乙醇；(3)沉淀杂质将步骤(2)的离心管在10000‑13000rpm条件下离心1分钟，将上清液转移至新的离心管中，除去沉淀杂质；(4)去杂质纯化DNA在步骤(3)得到的上清液中加入杂质分离液500‑600μL，彻底混匀5‑10分钟，然后在10000‑13000rpm条件下离心5‑10分钟，液体分为三层，将上层清液转移至新的离心管中，除去中下层沉淀杂质，此步骤中转移上层清液需在生物安全柜中进行；所述杂质分离液成分：氯仿；(5)磁珠结合DNA向步骤(4)得到的上清液中加入磁珠结合液600‑800μL，磁珠30‑100μL，室温条件下孵育15‑30分钟，得到磁珠混合液；所述磁珠结合液成分：异丙醇；(6)磁珠洗涤及DNA洗脱将步骤(5)得到的磁珠混合液放置于磁力架上3‑10分钟，待磁珠彻底吸附后使用磁珠洗涤液清洗2次，加入100‑200μL磁珠洗脱液，室温洗脱10分钟后置于磁力架上，待磁珠吸附后，吸取洗脱液到新的离心管中，该洗脱液即为含DNA的溶液；所述磁珠洗涤液成分：体积分数为75％‑80％的乙醇；所述磁珠洗脱液成分：无核酸酶水。