[发明专利]一种酵母表达载体的构建方法及其制备木聚糖酶的方法和应用有效
| 申请号： | 201810812611.4 | 申请日： | 2018-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN109022469B | 公开（公告）日： | 2021-10-15 |
| 发明（设计）人： | 赵向辉;刘婵娟;瞿明仁;黎力之;潘珂 | 申请（专利权）人： | 江西农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/81;C12N9/24;A23K50/10;A23K20/189 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 330045 江西省南*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种酵母表达载体的构建方法，包括以下步骤，以木聚糖酶基因片段构建pMD‑Xyn载体，利用限制性内切酶对pMD‑Xyn载体进行酶切，胶回收木聚糖酶基因片段，利用限制性内切酶酶切pPICZαA载体，将胶回收的木聚糖酶基因片段与酶切后的pPICZαA载体连接，导入大肠杆菌感受态细胞DH5α，转化构建pPICZαA‑Xyn载体。本发明基于香菇菌在发酵秸秆过程中能够产生木聚糖酶有效降解秸秆中木质纤维素的主要成分木聚糖，以其木聚糖酶基因构建了一种含木聚糖酶基因的酵母表达载体，以为木聚糖酶的商业化生产、秸秆类饲料的反刍动物利用方面提供理论基础和技术支撑。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 表达 载体 构建 方法 及其 制备 聚糖 应用 | ||
【主权项】：
1.一种酵母表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用PCR进行体外扩增获得香菇木聚糖酶基因片段，所述香菇木聚糖酶基因片段的序列为SEQ ID NO：1；(2)以香菇木聚糖酶基因片段构建pMD‑Xyn载体；(3)利用限制性内切酶对pMD‑Xyn载体进行酶切，胶回收木聚糖酶基因片段；(4)利用限制性内切酶酶切pPICZαA载体；(5)将步骤3中胶回收的木聚糖酶基因片段与步骤4中酶切后的pPICZαA载体连接，导入大肠杆菌感受态细胞DH5α，转化大肠杆菌构建pPICZαA‑Xyn载体，再利用质粒提取试剂盒从重组大肠杆菌中提取pPICZαA‑Xyn载体；所述pPICZαA‑Xyn载体基因序列为SEQ ID NO：2。
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