[发明专利]基于HMEJ的方法介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法在审
| 申请号： | 201810813577.2 | 申请日： | 2018-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN108949824A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 张涌;袁梦珂;韩静;吴腾;高元鹏;韦永可 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/65;C12N15/90;C12N5/10;C12Q1/66 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种利用Cas9切割核酸酶基于HMEJ的方法介导Ipr1定点插入获取转基因牛胎儿成纤维细胞的方法，本发明通过电穿孔的方法分别将HMEJ策略的供体载体与HR策略的供体载体和针对打靶位点的CRISPR/Cas9表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，供体载体中MSR1启动子可以使Ipr1实现在专职吞噬性细胞中的特异性表达，嘌呤霉素药物筛选后，经过PCR鉴定获得打靶的阳性克隆细胞。HMEJ策略获得阳性克隆细胞的效率高于传统的HR策略。以HMEJ策略获得的转基因阳性克隆细胞为核供体，获得转基因克隆胚胎，进一步将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫内，最终获得成活的Ipr1定点插入转基因克隆牛。 | ||
| 搜索关键词： | 阳性克隆细胞 供体载体 胎儿成纤维细胞 转基因克隆 策略获得 转基因牛 介导 牛胎儿成纤维细胞 发情 转基因克隆牛 特异性表达 表达载体 胚胎移植 药物筛选 嘌呤霉素 传统的 电穿孔 共转染 核供体 核酸酶 启动子 受体牛 吞噬性 转基因 位点 子宫 成活 胚胎 切割 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种Ipr1巨噬细胞特异性表达供体载体，其特征在于，该供体载体包括目的基因Ipr1以及用于将Ipr1基因通过HMEJ方法介导的重组定点插入牛28号染色体MAT1A和SFTPA1基因间的元件序列。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于西北农林科技大学，未经西北农林科技大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810813577.2/，转载请声明来源钻瓜专利网。
