[发明专利]三角枫的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种三角枫的组织培养方法，包括筛选茎段、叶片培养最佳的消毒方案、筛选最适宜三角枫茎段萌芽生长的启动培养基、筛选最适宜三角枫生根培养基等步骤。本发明的三角枫的组培方法具有污染率低、启动效果高、繁殖率高、组培苗健壮等优点；与现有技术相比，启动培养的嫩梢诱导率提高了60％，完成了增殖生根组培苗生产全过程。

主权项

1.一种三角枫的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的采集，于3‑5月份晴天的中午，采集当年生枝条的中上部带腋芽茎段；(2)外植体预处理，将步骤(1)中采集的的枝条剪成1‑2cm带腋芽的茎段，叶片修剪成方形，并将修剪的茎段和叶片放入洗衣粉的饱和溶液中浸泡10‑20min后用自来水冲洗干净，然后再将茎段和叶片放入农药中浸泡7‑12min后并用流水冲洗1.5‑2.5h；(3)茎段表面消毒，将步骤(2)中冲洗完毕的外植体进行进一步的消毒处理，然后对其两端进行修剪，并形态学朝上接种在供试培养基上；(4)叶片表面消毒，将步骤(2)中预处理好的叶片进一步的消毒处理，然后将叶片修剪并垂直于叶片的叶脉进行刻伤，背面紧贴培养基接入；(5)启动培养，将步骤(3)经过消毒灭菌的外植体两端切口处修剪成1‑1.5cm的单芽茎段，直立式接种于启动培养基上；(6)茎段处理，选择正交设计，设置3个因素，每个因素3个水平，每种处理均加入7.1g·L‑1琼脂，30g·L‑1蔗糖，并控制PH 5‑6.5；(7)初代培养环境，将步骤(5)中接种好的单芽茎段在温度为22‑25℃、光照周期为12h光照12h黑暗、光照强度为2000lx的条件下无菌培养20‑30d，叶片诱导愈伤组织则先进行暗培养3d，然后与单芽茎段培养的环境相同；(8)增殖培养，将步骤(7)中培养的组培苗截取成1‑2cm的单芽茎段，垂直接种于增殖培养基中增殖培养15‑25d；(9)生根培养，选取步骤(8)中增殖培养健壮的组培苗，将基部修剪后转入生根培养基进行根的诱导。