[发明专利]一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法

摘要

本发明公开了一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，包括以下步骤：步骤(1)制备待测定的木聚糖酶液样品；步骤(2)在垂直电泳槽内制备分离胶，再在分离胶上层上制备具有样品槽的浓缩胶层；步骤(3)在浓缩胶的样品槽中点样后，对垂直电泳槽施加电压，跑胶；步骤(4)利用割胶板将样品所在泳道的胶切成条状，去除浓缩胶，保留分离胶，即获得包含样品的条状分离胶；将包含样品的条状分离胶，放入乙酸钠溶液中，孵育；步骤(5)将孵育后的包含样品的条状分离胶紧密贴在培养皿中的底物胶的胶面上，将培养皿放置在30‑50℃的生化培养箱中，培养1‑36小时，直至有清晰的条带和透明圈出现。本发明中操作简单，且采用同一块胶，能够同时鉴定出木聚糖酶蛋白条带及活性。

主权项

1.一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)制备待测定的木聚糖酶液样品；步骤(2)制备分离胶层，再在分离胶上层上制备具有样品槽的浓缩胶层；步骤(3)将步骤(2)制备的胶放在垂直电泳槽中并加满Tris‑甘氨酸缓冲液，再在浓缩胶层的样品槽中点样后，对所述垂直电泳槽施加电压，跑胶，直至木聚糖酶液样品中的溴酚蓝条带跑至垂直电泳槽的底层为止；步骤(4)利用割胶板将木聚糖酶液样品所在泳道的胶切成条状，去除浓缩胶层，保留分离胶层，即获得包含样品的条状分离胶；将所述包含样品的条状分离胶，放入乙酸钠溶液中，孵育；步骤(5)将步骤(4)中孵育后的所述包含样品的条状分离胶紧密贴在培养皿的底物胶的胶面上，将培养皿放置在30‑50℃的生化培养箱中，培养1‑36小时，直至有清晰的条带和透明圈出现；所述底物胶由雷马素亮蓝R交联木聚糖、琼脂粉及pH 2.0‑8.0的乙酸钠缓冲液制成。