[发明专利]一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法

摘要

一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂及其制备方法，发酵菌种为黄孢原毛平革菌、污叉丝孔菌、云芝、密黏褶菌的混合菌种，通过固体发酵代谢产生具有脱除黄曲霉毒素功能的复合胞外酶，使用柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液浸泡固体发酵成品，经过压滤、超滤浓缩、喷雾干燥，得到复合酶制剂产品。本发明综合四种微生物表达胞外酶的酶学特征，配制固体发酵培养基，诱导发酵，获得胞外复合酶制剂产品，制备出分解黄曲霉毒素的复合酶制剂产品具有成本较低，安全性好，催化效率较高的特点，可有效分解陈化粮乙醇发酵后的醪液中的黄曲霉毒素，广泛应用于动物饲料工业和食品工业等领域中的黄曲霉毒素脱除。

主权项

1.一种用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂的制备方法，其特征在于：包括下列步骤：第一步：在无菌环境中，挑取保藏状态下的黄孢原毛平革菌、污叉丝孔菌、云芝、密黏褶菌，分别接种于种子培养基，然后在温度28‑32℃、转速150‑280rpm的条件下，培养30‑60h，获得黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种；第二步：在无菌环境中，将所述黄孢原毛平革菌基础菌种、污叉丝孔菌基础菌种、云芝基础菌种和密黏褶菌基础菌种，按体积比1：20‑30分别转接到新的种子培养基，在温度28‑32℃、转速150‑280rpm的条件下，培养30‑50h，获得黄孢原毛平革菌发酵菌种、污叉丝孔菌发酵菌种、云芝发酵菌种、密黏褶菌发酵菌种；第三步：在无菌环境中，将所述黄孢原毛平革菌发酵菌种、污叉丝孔菌发酵菌种、云芝发酵菌种、密黏褶菌发酵菌种，按体积比100：20‑30：10‑15：10‑20进行混合，获得混合发酵菌种；第四步：将所述混合发酵菌种接种到固体发酵培养基上，然后在相对湿度50‑90%、温度28‑37℃环境中，发酵24‑48h，接着保持环境条件不变，翻堆一次，继续发酵24‑48h，获得发酵成品；第五步：将所述发酵成品与pH值为3‑6.6的柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液按照体积比1：1‑2.8 混合后，过滤得到滤液；第六步：对第五步所得滤液进行超滤浓缩得到浓缩液；第七步：对第六步所得浓缩液进行喷雾干燥，得到的粉末即为用于脱除黄曲霉毒素的复合酶制剂产品。