[发明专利]一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用有效
| 申请号： | 201810884050.9 | 申请日： | 2018-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN108929882B | 公开（公告）日： | 2021-08-03 |
| 发明（设计）人： | 石贵阳;李由然;张梁;丁重阳;徐沙;李宗文 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/75 | 分类号： | C12N15/75 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 何金锦 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法及应用，实现了基因敲除及基因敲入，属于基因工程领域。该方法首先借助温度敏感型质粒PNZT1为载体构建温敏敲除(入)质粒；然后将敲除(入)质粒转化地衣芽孢杆菌经过变温传代实现敲除(入)盒同源替换靶基因；最后导入FLP重组酶表达质粒介导抗性基因的回收。本发明首次在地衣芽孢杆菌基因编辑中运用FLP/FRT重组系统并实现了无标记基因敲除及基因敲入，为地衣芽孢杆菌的代谢工程改造提供了有效的技术手段。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 地衣 芽孢 杆菌 基因 编辑 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种地衣芽孢杆菌的基因编辑方法，其特征在于：包括由温敏基因敲除质粒、及温敏基因敲入质粒介导的基因敲除及敲入，以及由FLP/FRT系统介导的抗性回收；所述由温敏基因敲除质粒、及温敏基因敲入质粒介导的基因敲除及敲入是指：温敏基因敲除及敲入质粒转化至地衣芽孢杆菌中，之后通过变温传代过程实现敲除盒及敲入盒同源替换靶基因，得到基因敲除菌株及基因敲入菌株；所述由FLP/FRT系统介导的抗性回收是指：首先构建FLP重组酶表达质粒；构建的重组酶表达质粒转化至地衣芽孢杆菌的基因敲除菌株及基因敲入菌株中；质粒表达的FLP重组酶特异性识别FRT位点并介导2个FRT位点之间的抗性基因表达盒的删除。
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