[发明专利]一种来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞及其诱导分化方法有效
| 申请号： | 201810890140.9 | 申请日： | 2018-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN108949688B | 公开（公告）日： | 2022-03-29 |
| 发明（设计）人： | 项鹏;李伟强;孙佳琦 | 申请（专利权）人： | 中山大学 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 段卉 |
| 地址： | 510275 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞及其诱导分化方法，其是解离多能干细胞制备成单细胞悬液，接种在基质胶包被的孔板中，以NCN2培养基每天换液；培养一定时间后消化收集细胞；贴壁培养收集的细胞，并将培养液更换为周细胞诱导培养液，传代培养后检测周细胞的细胞表型，即得。本发明解决人脑血管周细胞来源受限及其他非限定诱导途径多能干细胞来源的周细胞异质性与混杂的缺点，获得的神经嵴谱系周细胞具有很强的维持血管稳定能力与收缩能力；标准化诱导分化程序可保证不同批次间获得的细胞群具有良好的一致性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 来自 多能 干细胞 神经 谱系 细胞 及其 诱导 分化 方法 | ||
【主权项】：
1.一种来自多能干细胞的神经嵴谱系周细胞的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)体外贴壁培养多能干细胞，保持其未分化状态；(2)当(1)中细胞长到80～90％密合度后，在Accutase作用下消化成单个细胞，用含有5～15μM ROCK inhibitor的CDM培养液重悬细胞；(3)将细胞悬液按1×104～1×105/cm2的密度贴壁培养在培养皿中；(4)第二天将培养液更换为含CHIR99021和SB431542的NCN2培养液；(5)贴壁培养8天，以Accutase消化收集细胞；(6)贴壁培养收集的细胞，并将培养液更换为周细胞诱导液，传代培养2～5次后检测周细胞表型，即得。
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