[发明专利]一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法

摘要

一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，属于检测技术领域。其包括以下步骤：1）样品提取；2）样品净化；3）LC‑MS/MS测定；4）空白试验；5）结果计算和表述；6）绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量测定，样品溶液中待测物的响应值满足仪器检测的线性范围；定量和定性离子对同时存在，且信噪比≥3；样品溶液中待测物出现的色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液一致，允许偏差小于±0.5％，则可确定含有该药物。本发明可实现茶叶中吡蚜酮残留量的快速灵敏测定，有机溶剂用量少，为我国食品安全监管和农药管理提供技术支撑。

主权项

1.一种测定茶叶中吡蚜酮残留量的提取净化方法，其特征在于包括以下步骤：1）样品提取取粉碎茶叶样品1.0 g，加入10 mL甲醇和水的混合提取液，混匀放置15 min后涡旋1 min，以6000 r/min离心5 min，取5 mL上清液，35 ℃旋转蒸发至体积不再变化，加入10 mL 10 mmol/L的盐酸水溶液溶解残渣，待净化；2）样品净化取步骤1）得到的茶叶样品提取物分别加入5 mL甲醇和5 mL水预淋洗PCX固相萃取柱柱，弃去流出液；上样待净化液后，以5 mL 2%甲酸水和5 mL甲醇淋洗固相萃取柱柱，弃去流出液；以1%氨水甲醇淋洗固相萃取柱，收集所有流出液；35 ℃旋转蒸发至近干，氮气吹干，1 mL甲醇和水的混合溶液定容，过0.22 μm 有机膜，供LC‑MS/MS测试；3）LC‑MS/MS测定基质匹配标准溶液和样品溶液在以下设定的液相色谱‑质谱/质谱条件下进样：A）液相色谱‑质谱/质谱仪器参数：液相色谱：色谱柱：Waters BEH C18色谱柱；流动相组成：流动相A为0.1%甲酸乙腈，流动相B为水；流速0.25 mL/min；流动相洗脱程序：0‑0.5min、5%A，0.5‑3.0 min、5%A‑30%A，3.0‑4.0 min、30%A‑70%A，4.0‑4.8 min、70%A‑99%A,保持1min，5.8‑6.5 min、99%A‑5%A，保持1min；进样体积5µL； 质谱条件：电离方式ESI+,多级反应监测MRM模式测定,毛细管电压3.5 kV，离子源温度150℃，去溶剂化温度350℃，锥孔反吹气流量50 L/h，脱溶剂气流量650 L/h，定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差：相对离子丰度＞50％，允许的相对偏差±20％；相对离子丰度＞20％～ 50％，允许的相对偏差±25％；相对离子丰度＞10％～ 20％，允许的相对偏差±30％；相对离子丰度≤10％，允许的相对偏差±50％；B）吡蚜酮质谱参数*定量离子4）空白试验除不加样品外，均按上述步骤1）、步骤2）、步骤3）操作进行；5）结果计算和表述按以下公式计算样品中吡蚜酮的质量浓度，处理结果须扣除空白值：式中：Xi──样品中吡蚜酮的残留量，单位为毫克每千克；Ci──从标准曲线上得到吡蚜酮的溶液浓度，单位为毫克每升；V──样液最终定容体积，单位为毫升；m──最终样液所代表的试样质量，单位为克；6）判断以质量浓度X为横坐标，峰面积比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量测定，样品溶液中待测物的响应值满足仪器检测的线性范围；定量和定性离子对同时存在，且信噪比≥3；样品溶液中待测物出现的色谱峰保留时间与基质匹配标准溶液一致，允许偏差小于±0.5％，则可确定含有该药物。