[发明专利]含驯鹿NADPH-细胞色素P450还原酶基因的重组载体构建及表达、分离纯化方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体地说，涉及含驯鹿NADPH‑细胞色素P450还原酶基因的重组载体及表达、分离纯化和活性测定的方法：1)根据从驯鹿的基因组上注释出的NADPH‑细胞色素P450还原酶基因和大肠杆菌密码子偏好性，得到优化后的驯鹿NADPH‑细胞色素P450还原酶基因序列，同理得到根据大肠杆菌密码子偏好性优化后的狍子和羊的NADPH‑细胞色素P450还原酶基因序列，用以作为对照；2)利用设计的引物，通过gibson连接方法，将优化后的驯鹿、狍子和羊25羟基维生素D‑1α羟化酶基因分别构建于大肠杆菌表达载体pET‑28a，获得重组载体。含驯鹿NADPH‑细胞色素P450还原酶基因的菌株表达获得酶的催化活性是羊的20倍，是狍子的5倍。

主权项

1.含驯鹿NADPH‑细胞色素P450还原酶基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体的构建方法如下：1)根据从驯鹿的基因组上注释出的NADPH‑细胞色素P450还原酶基因和大肠杆菌密码子偏好性，得到优化后的驯鹿NADPH‑细胞色素P450还原酶基因序列，同理得到根据大肠杆菌密码子偏好性优化后的狍子和羊的NADPH‑细胞色素P450还原酶基因序列，用以作为对照；2)利用设计的引物，通过gibson连接方法，将优化后的驯鹿、狍子和羊NADPH‑细胞色素P450还原酶基因分别构建于大肠杆菌表达载体pET‑28a，获得重组载体。