[发明专利]一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法与应用在审
| 申请号： | 201810907482.7 | 申请日： | 2018-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN110055290A | 公开（公告）日： | 2019-07-26 |
| 发明（设计）人： | 储消和;吴黎诚;生英涛;陈万河;程跃;徐顺清;沈建;方明山;余炜;柳鹏福;孙俊杰 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学;浙江绿创生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P13/22 | 分类号： | C12P13/22;C12N11/08 |
| 代理公司： | 杭州赛科专利代理事务所(普通合伙) 33230 | 代理人： | 尹建民 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加氨苄青霉素(100mg/L)30‑37℃，220rpm，培养12‑16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中培养10‑12h；(3)离心收菌，得到菌体，压榨破胞，加壳聚糖溶液絮凝，高速离心，获得上清酶液，加入固定化载体EP200，25℃搅拌混合12‑24h，三足式离心收集固定化酶，用50mM的磷酸钾缓冲液(pH8.0)，多次洗涤，过滤，获得固定化酶；(4)固定化酶20g，加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14‑16g/L的丙酮酸钠、10‑12g/L的邻苯二酚、40‑45g/L的氯化铵、2‑5g/L的亚硫酸钠、1‑3g/L的EDTA，调pH7.5‑8.5。 | ||
| 搜索关键词： | 固定化酶 催化生产 底物溶液 一级种子 左旋多巴 接种 磷酸钾缓冲液 发酵培养基 固定化载体 壳聚糖溶液 丙酮酸钠 高速离心 离心收集 离心收菌 邻苯二酚 上清酶液 亚硫酸钠 震荡反应 青霉素 单菌落 氯化铵 三足式 试管 压榨 加氨 搅匀 菌体 絮凝 摇瓶 密封 洗涤 过滤 应用 | ||
【主权项】：
1.一种固定化酶催化生产左旋多巴的方法，其特征在于：(1)挑单菌落接种到含LB培养基的试管中，加氨苄青霉素(100mg/L)30‑37℃，220rpm，培养12‑16h，得到一级种子；(2)将所述一级种子接种到含发酵培养基的摇瓶中，30‑37℃，200‑250rpm，培养2‑5h，加IPTG至终浓度0.6mM，28‑32℃，180‑220rpm，培养10‑12h；所述发酵培养基组分如下：胰蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、甘油5g/L，磷酸二氢钾2.31g/L、三水磷酸氢二钾16.43g/L；(3)离心收菌，得到菌体，压榨破胞，加壳聚糖溶液絮凝，高速离心，获得上清酶液，加入固定化载体EP200，25℃搅拌混合12‑24h，三足式离心收集固定化酶，用50mM的磷酸钾缓冲液(pH8.0)，多次洗涤，过滤，获得固定化酶；(4)固定化酶20g，加入底物溶液，搅匀，25℃，密封震荡反应；所述底物溶液包括14‑16g/L的丙酮酸钠、10‑12g/L的邻苯二酚、40‑45g/L的氯化铵、2‑5g/L的亚硫酸钠、1‑3g/L的EDTA，调pH7.5‑8.5。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江工业大学;浙江绿创生物科技有限公司，未经浙江工业大学;浙江绿创生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810907482.7/，转载请声明来源钻瓜专利网。
