[发明专利]运营中的沥青路面上微生物种属及其数量确定方法

摘要

本发明目的是提供一种运营中的沥青路面上微生物种属及其数量确定方法，解决目前运营中的沥青路面微生物种属不明确和数量难以确定的问题。本发明首先根据运营中沥青路面的工作环境条件，现场采集样本，制备稀释菌液，用接种环挑取第一次富集培养液，在油平板上划线分离，三次富集后，观察在平板上形成的优势菌种，在牛肉膏蛋白胨培养基上多次划线分离，以纯化得到的单菌落；并通过16S rDNA的PCR、测序及NCBI数据库Blast比对分析，鉴定微生物类别；在无菌室内火焰旁，分别测定六个不同稀释度的菌落数。本发明提出的沥青路面微生物类别及其数量方法为沥青路面运营过程微生物对沥青的老化作用奠定基础，提出沥青路面抗微生物老化措施，延长沥青路面使用寿命。

主权项

1.一种运营中的沥青路面上微生物种属及其数量确定方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：(1)选取不同等级道路的典型路段，在路肩部分沥青路面表层取样，将取得的试样装入已灭菌的样品袋中，密封，记录样品编号、采集时间、地点，每隔20米采集一份样品，每个路段采集10份样品；(2)室内除去杂物后风干，制备成大小相同的样品，取一定质量样品放入液体培养基中，在28℃恒温摇床上富集培养7天，制备稀释度为10‑1、10‑2、10‑3、10‑4、10‑5、10‑6的溶液；(3)采用无菌吸管分别吸取每个稀释度的菌液0.1毫升三次，对应滴入已写上编号的三个平板培养基内，将涂布好的平板培养基倒置于30℃恒温摇床中培养4天；(4)用接种环挑取第一次富集培养液，在油平板上划线分离，三次富集后，观察在平板上形成的优势菌种，选取形态一致的单菌落，在牛肉膏蛋白胨培养基上多次划线分离，以纯化得到的单菌落，通过16S rDNA的聚合酶链反应、测序及NCBI数据库的Blast比对分析，鉴定具体微生物的种属；(5)在无菌室内火焰旁分别测定不同稀释度的菌落数，用灭菌吸管各吸取1毫升注入平皿，注入15毫升营养琼脂培养基，旋转平皿，混合均匀后，置于培养箱内培养24小时，进行菌落统计，确定不同种属微生物数量。