[发明专利]一种单分子标签TCR免疫组库高通量测序文库的构建方法在审
| 申请号： | 201810918681.8 | 申请日： | 2018-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN109136329A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 鞠巍;徐根明;潘艺;赵谦 | 申请（专利权）人： | 湖南大地同年生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 410205 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种单分子标签TCR免疫组库高通量测序文库的构建方法。利用SMART技术和特异性引物，能够特异性捕获并无偏好扩增人源RNA中低丰度TCR‑α和TCR‑β转录本的整个V(D)J可变区域，也可单独捕获扩增TCR‑α或TCR‑β，或同时捕获扩增TCR‑α和TCR‑β。本发明能够最大程度消除扩增或测序过程中产生的碱基错误，还原原始样本中分子数目以及表达丰度，方法简便易行，建立的文库适用于多个测序平台。 | ||
| 搜索关键词： | 扩增 捕获 测序文库 免疫组库 单分子 高通量 构建 标签 生物技术领域 特异性引物 测序过程 测序平台 可变区域 原始样本 低丰度 转录本 丰度 碱基 偏好 人源 文库 还原 | ||
【主权项】：
1.一种单分子标签TCR免疫组库高通量测序文库的构建方法，其特征在于按照以下步骤进行：(1)提取样本总RNA；(2)以总RNA为原料合成First‑strand cDNA，同时进行模板转换；(3)在步骤(2)后加入PCR1反应体系，进行半巢式扩增，特异性扩增目标区域；(4)在步骤(3)后进行产物纯化；(5)在步骤(4)后加入PCR2反应体系，进行接头连接反应和扩增；(6)在步骤(5)扩增产物后加入磁珠进行产物分选纯化，纯化后的产物即为TCR免疫组库文库。
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