[发明专利]一种羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库及构建方法有效

专利信息
申请号: 201810928386.0 申请日: 2018-08-15
公开(公告)号: CN108998443B 公开(公告)日: 2021-02-02
发明(设计)人: 陈国华;景志忠;贾怀杰;何小兵;房永祥;宋世斌 申请(专利权)人: 中国农业科学院兰州兽医研究所
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10;C40B50/06;C40B40/08
代理公司: 北京高沃律师事务所 11569 代理人: 刘奇
地址: 730000*** 国省代码: 甘肃;62
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摘要: 发明提供了一种羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库的制备方法,包括制备羊睾丸成纤维细胞;提取羊睾丸成纤维细胞RNA;合成cDNA,进行cDNA文库均一化;cDNA与pPR3‑N载体连接,连接产物转化宿主细胞DH5α,获得羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库,并进行克隆验证;筛选羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库等步骤。本发明的cDNA库容量为7.5×105,片段的大小为200‑2000bp,平均长度为1000bp,文库的重组率为100%。通过利用羊口疮病毒的膜蛋白对文库进行筛选,证明了该文库是一个高质量的文库。
搜索关键词: 种羊 睾丸 纤维 细胞膜 体系 酵母 cdna 文库 构建 方法
【主权项】:
1.一种羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库的制备方法,包括以下步骤:1)制备羊睾丸成纤维细胞;2)提取羊睾丸成纤维细胞RNA;3)合成cDNA,进行cDNA文库均一化;4)cDNA与pPR3‑N载体连接,连接产物转化宿主细胞DH5α,获得羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库,并进行克隆验证;5)筛选羊睾丸成纤维细胞膜体系酵母cDNA文库。
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