[发明专利]一种结合肉毒杆菌的自体胶原蛋白注射剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种结合肉毒杆菌的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，属于医学美容技术领域，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织；步骤二，传代培养；步骤三，胶原蛋白积累；步骤四，获取注射剂。该技术方案通过将自体的成纤维细胞分离，通过成纤维细胞分泌出胶原蛋白，在作为自体胶原蛋白注射剂后能够减少人体排异反应，并将肉毒杆菌与自体胶原蛋白注射剂结合，在利用肉毒杆菌造成皱纹的肌肉麻痹掉，使肌肉不收缩的同时，利用注射剂内的成纤维细胞和其他活性成分，保证机体内组织相容性，提高皱纹祛除效果。

主权项

1.一种结合肉毒杆菌的自体胶原蛋白注射剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，获取自体成纤维组织，在常温下用生理盐水清洗，将自体成纤维组织剪成小块，向其中加入磷酸缓冲盐溶液混合，室温下离心去除下层液体，用磷酸缓冲盐溶液冲洗后再次离心，去除上清液，加入胶原酶，放置于37℃恒温震荡箱中30min～60min，再次离心去除上清液，然后加入含有胎牛血清的DMEM培养液，用细胞筛过滤后离心去除上清液，再次加入含有胎牛血清的DMEM培养液中，在37℃温度条件下，5％CO2恒温培养；步骤二，传代培养，将步骤一的成纤维细胞每隔2天更换胎牛血清的DMEM培养液，待细胞生长至80％融合后用胰蛋白酶消化后传代，在成纤维细胞生长三代以后，从胎牛血清的DMEM培养液重取出；步骤三，胶原蛋白积累，将成纤维细胞放入无血清培养基，在37℃无血清培养基中培养，使成纤维细胞分泌出胶原蛋白；步骤四，获取注射剂，将成纤维细胞和胶原蛋白从无血清培养基中取出，用磷酸缓冲盐溶液清洗洗去培养基，加入林格氏液、葡萄糖液、肉毒杆菌混合均匀，制成自体胶原蛋白注射剂，4℃保存。